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            【中文期刊】 黄天治  秦玺  等 《中国生物制品学杂志》 2024年37卷6期 641-645页ISTICCSCDCABP

            【摘要】 目的 探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)装载目的核酸完整性检测方法,并初步建立分析算法.方法 消化rAAV外游离DNA片段,提取病毒基因组,设计5对搭接引物,采用正交排列方式...

            【关键词】 重组腺相关病毒核酸完整性

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            【中文期刊】 朱蕊  武幸濡  等 《生物技术》 2023年33卷2期 135-142页ISTICCA

            【摘要】 [目的]构建人沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)的去乙酰化酶活性位点突变体,并验证其去乙酰化酶活性.[方法]设计合成人SIRT2的酶活性关键位点(Q167、N168和H187)突变...

            【关键词】 SIRT2去乙酰化酶活性重叠延伸PCR

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            【中文期刊】 陈秋玉  徐闰  等 《生物技术》 2021年31卷6期 521-526,572页ISTICCA

            【摘要】 [目的]克隆人γ干扰素(hIFNγ)基因,借助自剪切肽P2A,构建hIFNγ-P2A-RFP(红色荧光蛋白)融合基因转座子表达载体,并在HEK293T细胞中检测其表达水平.[方法]首先,以脂多糖(LPS)激活人外周血淋巴细胞,提取总RNA,...

            【关键词】 人γ干扰素重叠延伸PCR自剪切肽P2A

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            【中文期刊】 陈凡  傅一勤  等 《中国生物化学与分子生物学报》 2018年34卷1期 61-68页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP

            【摘要】 基因突变对生命的进化具有重要意义,针对质粒的DNA定点诱变技术也是基因工程、蛋白质工程研究中的重要手段之一.为了提高质粒定点诱变的效率,本研究利用引物部分重叠的设计方案,使用Tm值相对固定的引物设计模式,将同一引物分为重叠区(Tm =50±...

            【关键词】 PCR质粒定点诱变

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            【中文期刊】 陈麒名  常菲菲  等 《应用与环境生物学报》 2016年22卷2期 179-183页ISTICPKUCSCDCABP

            【摘要】 CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的调控转录激活因子,可与下游冷应答基因启动子的核心序列CBT/DRE元件(CCGAC)特异性地结合,启动耐寒基因的表达,提高植物的抗寒能力.为揭示播娘蒿(D...

            【关键词】 播娘蒿CRT/DR元件AP2区域

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            【中文期刊】 刘洋  勾文峰  等 《沈阳药科大学学报》 2019年36卷8期 729-734页ISTICCSCDCA

            【摘要】 目的 通过重叠延伸PCR技术构建CD74-ROS1-L1951R点突变质粒.方法 根据CD74-ROS1融合基因序列和真核表达质粒pCMV-C-Flag上的多克隆位点设计引物,利用重叠延伸PCR技术对CD74-ROS1融合基因进行基因定点突...

            【关键词】 CD74-ROS1-L1951R非小细胞肺癌重叠延伸PCR技术

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            【中文期刊】 哈传博  赵然  等 《生物技术》 2018年28卷4期 329-334,391页ISTICCA

            【摘要】 [目的]构建抵抗shRNA的同义突变SND1慢病毒质粒,并在SND1敲低的卵巢癌细胞系中回复表达SND1.[方法]依据密码子的简并性,针对shRNA识别的序列(TCTCGTCTCAAACTCTATTTG)设计同义突变序列(TAGG-TATA...

            【关键词】 SND1质粒构建重叠延伸PCR

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            【中文期刊】 刘超波  孙俊  等 《生物技术》 2017年27卷4期 307-311页ISTICCA

            【摘要】 [目的]构建小鼠白介素(interleukin,IL)-39单链融合基因及其真核表达载体.[方法]通过RT-PCR得到小鼠EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus-induced gene 3,EBI3)及IL-23p19基...

            【关键词】 小鼠白介素-39重叠延伸PCR单链融合基因

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            【中文期刊】 盛花开  衣玉兰  等 《生物技术》 2016年26卷1期 81-86页ISTICCA

            【摘要】 [目的]得到表达多个基因的重组大肠杆菌,以期实现葡萄糖为碳源生产反式-4-羟基-L-脯氨酸.[方法]以菌液为模板,PCR得到不同来源的proB、proA、proC、p4h基因,重叠PCR串联相邻基因,所得片段通过无缝组装与pET-28a载体...

            【关键词】 重组大肠杆菌重叠PCR无缝组装

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            【中文期刊】 李芳  高婧  等 《生物技术》 2016年26卷5期 415-420页ISTICCA

            【摘要】 [目的]基于重叠延伸PCR技术,构建串联亲和层析标签(TAP)标记的幽门螺杆菌骨架蛋白MreB的重组质粒.[方法]将幽门螺杆菌MreB基因终止密码子TAA前DNA序列(MreBa)、TAP和终止密码子TAA后的DNA序列(MreBb),通过...

            【关键词】 幽门螺杆菌骨架蛋白MreB

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            【中文期刊】 喻博伦  程钢  等 《生物技术》 2016年26卷3期 213-218页ISTICCA

            【摘要】 [目的]克隆水稻线粒体基因OsEF-Tu并进行表达.[方法]RT-PCR分别扩增OsEF-Tu基因cDNA的5'端和3'端序列,重叠PCR克隆OsEF-Tu的cDNA序列.生物信息学分析OsEF-Tu基因,构建水稻线粒体基因OsEF-Tu原...

            【关键词】 水稻线粒体蛋白OsEF-Tu

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            【中文期刊】 王晓云  雷志强  等 《生物技术》 2015年25卷5期 451-457,462页ISTICCA

            【摘要】 [目的]糖基转移酶UGT94E5和UGT75L6催化栀子果实中西红花总苷生物合成途径的末端步骤.该研究利用重叠延伸PCR法,合成编码这两个酶的基因序列.[方法]首先将基因分段,每段两端均加上pUC57载体的多克隆位点作为接头,拼接成800 ...

            【关键词】 基因合成栀子

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            【中文期刊】 罗颖  李燕萍  等 《生物工程学报》 2025年41卷4期 1500-1514页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 本研究旨在提供一种非动物源纳米抗体文库设计、合成及筛选方案,探索框架区的选择及互补决定区(complementarity determining region,CDR)的设计对于合成纳米抗体文库的影响,为增加合成纳米抗体文库的有效性、多样性...

            【关键词】 纳米抗体全合成文库噬菌体展示

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            【学位论文】 作者:曾芳 导师:唐冬生   张细权   华南农业大学   畜牧学 动物遗传育种与繁殖(硕士) 2008年

            【摘要】 基因打靶技术是解决转基因动物中外源基因不稳定表达和遗传问题的主要方法之一,但基因打靶所依赖的同源重组是10-5~10-6的低概率事件。近年来,本研究小组建立了一种以动物rRNA基因间的内部转录间隔序列为靶位点的多位点基因打靶技术,这种技术能...

            【关键词】 rRNA基因锌指蛋白

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            【学位论文】 作者:庄东海 导师:许军   哈尔滨医科大学   临床医学 外科学(普外)(硕士) 2008年

            【摘要】 目的: 为了构建含有绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒介导的B区缺失(760AA-1639AA)的人凝血因子VIII(FVIIIBDcDNA) 方法: 从人肝脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR及重叠延伸PCR技术,扩增出B区缺失的凝...

            【关键词】 凝血因子Ⅷ逆转录病毒载体

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            【学位论文】 作者:倪剑锋 导师:吴文芳   中国科学院沈阳应用生态研究所   生物学 微生物学(博士) 2005年

            【摘要】 神经节苷脂GD2在正常的组织细胞中很少存在,而在黑色素瘤、小细胞肺癌、等肿瘤细胞表面大量存在.因此能特异性结合神经节苷脂GD2,激活肿瘤附近免疫细胞功能的基因工程融合蛋白将为上述肿瘤的治疗开辟新的途径.实验中采用重叠PCR技术,将抗神经节苷...

            【关键词】 重叠PCR单链双特异性抗体

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            【学位论文】 作者:孔双泉 导师:盛军   吉林大学   药学 微生物与生化药学(硕士) 2004年

            【摘要】 我们通过多种方式提高CHO细胞中的HBsAg的表达量。首先,我们采用重叠PCR技术将213,216,224位三个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子,来提高基因表达水平。 其次,我们在构建两个表达载体P1和P4时选用了CMV强...

            【关键词】 表达载体单克隆

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            【学位论文】 作者:时成波 导师:吕安国   中国科学院沈阳应用生态研究所   生物学 微生物学(博士) 2002年

            【摘要】 Staphylococcal enterotoxin A(SEA)是由金黄色葡萄球菌分泌至胞外的一种单亚基蛋白质.它能与抗原递呈细胞上的MHCⅡ受体结合,激发大量T细胞活化,释放多种细胞因子.正是由于SEA是一种强的T细胞激活剂,近年来,它...

            【关键词】 SEA表达载体

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            【中文期刊】 姜孟伶  曹金丹  等 《药物生物技术》 2025年32卷3期 253-258页ISTICCA

            【摘要】 利用噬菌体展示技术筛选人源肌红蛋白(Myoglobin,Mb)的单链抗体(single chain antibody fragment,scFv),以制备应用于临床免疫组化的Mb单克隆抗体.利用重组Mb抗原免疫新西兰白兔,提取脾脏组织的总R...

            【关键词】 肌红蛋白单链抗体噬菌体展示

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            【中文期刊】 徐家馨  王静静  等 《中国病原生物学杂志》 2024年19卷11期 1251-1254,1259页ISTICPKUCSCD

            【摘要】 目的 构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库.方法 从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA.以cDNA为模板进行...

            【关键词】 SFTSV噬菌体展示抗体文库库容量

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            【中文期刊】 李菊  石晓玲  等 《病毒学报》 2024年40卷3期 563-573页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 为建立小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)反向遗传学体系,本研究以PPRV Nigeria75/1疫苗株基因组序列为基础,PCR分7个片段扩增病毒基因组,运用重叠延伸PCR(Gene ...

            【关键词】 PPRV Nigeria 75/1疫苗株C基因SOE-PCR

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            【中文期刊】 王洋  王永进  等 《病毒学报》 2024年40卷2期 365-373页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 为了获得既能高效扩增外源基因,又不产生复制型子代病毒的腺病毒载体,我们构建了一个Ⅲa基因缺失的单周期腺病毒载体.本研究在前期已构建的E3区携带绿色荧光蛋白GFP的人7型腺病毒载体pK-Ad7E3GFP基础上进行.首先设计引物扩增包含氨苄青霉...

            【关键词】 Ⅲa基因人7型腺病毒载体单周期载体

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            【中文期刊】 陈娟  邹小辉  等 《病毒学报》 2023年39卷3期 791-799页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 限制性酶切-组装是构建和改造腺病毒载体的一种简便方法,本研究用该方法构建同时携带GFP和萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,Fluc)报告基因的猴1型腺病毒(Simian Adenovirus 1,SAdV-1)载体.PC...

            【关键词】 报告基因限制性酶切-组装猴1型腺病毒

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            【中文期刊】 郭励劼  王泌林  等 《生物技术》 2023年33卷1期 1-8页ISTICCA

            【摘要】 [目的]明确m6A去甲基化酶ALKBH5对含S1PR3基因3'-非编码区(3'-UTR)双荧光素酶报告基因的调控作用.[方法]以大鼠前额叶皮层脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增S1PR3基因3'-UTR中含有m6A修饰位点...

            【关键词】 m6A1-磷酸鞘氨醇受体3抑郁症

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            【中文期刊】 于美美  崔晏硕  等 《中国病原生物学杂志》 2022年17卷1期 37-42页ISTICPKUCSCD

            【摘要】 目的 构建人 IL-2与 EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)基因 BZLF1 的融合基因重组 BCG(recombinant BCG,rBCG),并分析其免疫效果.方法 通过重叠延伸技术,构建融合基因ILBZ,将IL...

            【关键词】 IL-2BZLF1亚单位疫苗

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            【中文期刊】 王悄悄  郑峰  等 《中国病原生物学杂志》 2022年17卷7期 770-773,778页ISTICPKUCSCD

            【摘要】 目的 构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料.方法 使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为...

            【关键词】 2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C过表达株

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            【中文期刊】 孟祥平  白雪飞  等 《基因组学与应用生物学》 2017年36卷11期 4445-4450页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 为了提高BTRCP-CypA融合基因的表达量,对基因密码子进行优化,主要是去除过多富含AT碱基以及提高GC含量.在此基础上提出一种用于基因合成的PCR法.拆分单链寡核首酸长度为59 nt左右,重叠区碱基数14~21 nt,Tm值为46~62...

            【关键词】 基因合成PCR化学合成

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