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【学位论文】 作者：徐灵龙 导师：王云峰 东北农业大学 生物学 动物学（硕士） 2007年
【摘要】 随着传统抗生素的大量以及不正当使用，药物残留和菌株耐药性等问题变得越来越严重。研究与开发更为有效，同时对人、动物以及环境无害的现有抗生素的替代品是当今科研领域的研究热点。抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽，是宿主免疫防...
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【学位论文】 作者：吴迪 导师：周占琴 张英汉 西北农林科技大学 西北农林科技大学 畜牧学 动物遗传育种与繁殖（硕士） 2005年
【摘要】 生物素(Biotin)是生物机体内主要代谢过程所必需的生长因子之一，对生物生理具有不可替代的作用。它在畜牧业、分子生物学，生物发酵及医药行业等领域应用广泛。由于生物素不能直接从自然界获得，通常化学合成的方法得到。由于化学合成生产工艺复杂.....
【关键词】 透明颤菌血红蛋白基因 ； 大肠杆菌 ；
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【学位论文】 作者：廖劲松 导师：郭勇 华南理工大学 华南理工大学 化学工程与技术 发酵工程（博士） 2004年
【摘要】 首先,对微甘菊愈伤组织诱导和继代增殖培养进行系统研究,愈伤组织诱导研究表明:外植体中芽尖诱导率最高,在含2,4-D2.0mg/L、KT1.0mg/L、pH5.8的MS培养基上25℃黑暗条件下愈伤组织诱导效果较好.继代培养的关键问题在于褐变控...
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【学位论文】 作者：乐怡 导师：刘进元 清华大学 生物学 生物化学与分子生物学（硕士） 2002年
【摘要】 烟草野火病菌分泌的烟毒素,对许多植物和细菌均有毒害作用,但烟草野火病菌自身却不受烟毒素影响.来源于烟草野火病菌的抗烟毒素蛋白(TRC)可以使烟毒素失活,从而保护自身免受其毒害.该研究在成功地克隆出抗烟毒素蛋白基因(trc),并在大肠杆菌中获...
- 概要：
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【中文期刊】 王毕杰 魏天予 等 《生物加工过程》 2024年22卷5期 540-548页ISTICCABP
【摘要】 甘露糖赤藓糖醇脂(mannosylerythritol lipids,MELs)是一种新型的生物表面活性剂,除了具有与化学表面活性剂相似的界面活性、表面活性和乳化性外,还具有环境兼容、安全低毒的特点以及抑菌、诱导细胞凋亡及分化等生物活性,使...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 滕飞 柯博文 等 《现代食品科技》 2024年40卷12期 41-48页
【摘要】 胶原蛋白(Collagen)目前广泛应用于食品、医疗、美容等领域,然而,重组胶原蛋白存在包涵体形式表达及纯度较低等问题,限制了其规模化生产及制备应用.该研究在Ⅰ型人源化胶原蛋白hCOL1A1的基础上,在其N末端融合了小分子泛素样修饰蛋白(S...
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【中文期刊】 刘志成 闫干干 等 《包头医学院学报》 2024年40卷1期 85-90页CA
【摘要】 目的:优化新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLpro)在大肠杆菌中的表达条件,并制备高特异性大鼠抗PLpro多克隆抗体.方法:通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度,确定PLpro在大肠杆菌中的最佳...
【关键词】 新型冠状病毒；木瓜样蛋白酶(PLpro)；原核表达；
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【中文期刊】 朱乐婷 宋文军 等 《食品研究与开发》 2024年45卷23期 194-202页
【摘要】 蔗糖磷酸化酶(sucrose phosphorylase,SPase)不仅能够水解蔗糖产生α-葡萄糖-1-磷酸,还能对多种底物进行糖基化修饰.来源于青春双歧杆菌的蔗糖磷酸化酶(Bifidobacterium adolescentis suc...
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【中文期刊】 杨增财 刘梦雪 等 《中国野生植物资源》 2024年43卷8期 57-63页CSCD
【摘要】 目的:优化茅苍术离体培养方法及条件,建立一种茅苍术高效组培快繁技术体系.方法:以茅苍术无菌苗为外植体,优化培养条件,筛选最佳增殖培养基,并采用组培瓶内-瓶外结合对茅苍术继代芽苗进行生根诱导,获得组培苗.结果:茅苍术胚轴切割以横切、仅保留下胚...
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【中文期刊】 计慧君 林羿光 等 《环境昆虫学报》 2023年45卷3期 703-710页ISTICPKUCSCD
【摘要】 化学杀虫剂是农业害虫防治的主要手段,然而农业害虫已对化学杀虫剂产生了抗药性.RNA农药的应用将是减少使用化学杀虫剂的一种途径.RNA农药具有专一、高效、易降解和对环境友好等优点而受到了关注,但在靶标分子、靶标分子的双链 RNA(dsRNA)...
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【中文期刊】 佟春玉 张喆林 等 《中国免疫学杂志》 2022年38卷15期 1866-1871页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:疫苗防治将成为金黄色葡萄球菌防控的主要方式,如何解决靶向亚单位疫苗生产中包涵体靶向抗原的复性问题,将是蛋白亚单位疫苗生产的核心问题.方法:构建靶向树突状细胞DEC205受体的金黄色葡萄球菌重组scFv-DEC205-Trap质粒进行P...
【关键词】 金黄色葡萄球菌TRAP；scFv-DEC205-Trap重组抗原；变性；
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【中文期刊】 刘之睿 黄嘉瑶 等 《湖南畜牧兽医》 2023年5期 30-36页
【摘要】 为制备高致病性的TGEV毒株重组S蛋白,试验将重组质粒pET28a-TGEV-S2、pET28a-TGEV-S3,转化至E.coli BL21(DE3)表达菌株,设置不同的诱导温度、IPTG浓度和诱导时长对其进行表达条件的优化,并使用纯化试...
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【中文期刊】 严梦涵 许丽惠 等 《福建农林大学学报（自然科学版）》 2023年52卷4期 546-553页
【摘要】 利用生物信息学软件I-Mutant2.0 分析植物乳酸菌素PlnJ的氨基酸序列,筛选出最不稳定的氨基酸位点,进行定点突变,构建点突变重组表达质粒.对点突变重组表达质粒进行原核表达,并筛选表达最适条件;采用镍亲和层析法纯化重组蛋白.以大肠杆菌...
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【中文期刊】 何海燕 付跃 等 《饲料研究》 2023年46卷7期 77-80页
【摘要】 试验旨在探讨使用三叶青细胞悬浮培养生产三叶青黄酮的可行性.试验以野生三叶青叶片和茎段为外植体诱导愈伤组织,测定增殖、单细胞培养及其总黄酮含量,悬浮培养细胞经不同液体培养基配方、光照方式、摇床转速、接种量、pH值、培养天数培养,以乙醇为溶剂,...
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【中文期刊】 卢丹妮 洪沛雄 等 《现代食品科技》 2023年39卷2期 170-179页
【摘要】 该研究以公认安全(Generally Recognized as Safe,GRAS)的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)为宿主,构建高产紫色杆菌素的重组菌株.利用谷氨酸棒杆菌天然大质粒pTET3的复制与分...
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【中文期刊】 张晓琦 徐炜 等 《食品与生物技术学报》 2023年42卷4期 57-68页
【摘要】 挖掘具有高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶(levansucrase,LS)并进行β-(2,6)果聚糖的高效合成.以分子动力学模拟的方式筛选出具有潜在高热稳定性的β-(2,6)果聚糖蔗糖酶.将目的酶在大肠杆菌Escherichia co...
【关键词】 β-(2,6)果聚糖蔗糖酶；热稳定性；β-(2,6)果聚糖；
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【中文期刊】 王敬红 李灵灵 等 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年34卷2期 75-80,115页
【摘要】 把菌株BYL-3(Trametes hirsuta)、BYL-7(Trametes versicolor)和BYL-8(Trametes hirsuta)三株具有木质素分解能力的真菌混合培养,构建了具有更高木质素降解能力的真菌菌群LDFC....
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【中文期刊】 曹冰东 付文苑 等 《中国瓜菜》 2022年35卷5期 8-16页
【摘要】 为优化黄瓜未授粉子房培养高频胚诱导体系,以9个不同黄瓜基因型为试材,对影响未授粉子房培养胚发生和植株再生的因素进行研究,并对再生植株的倍性和同质性进行检测.结果表明,不同基因型之间出胚率差异显著,其中SG033出胚率最高,达95.93％,S...
- 概要：
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【中文期刊】 贾娜 王晓红 等 《种子》 2022年41卷4期 36-43页
【摘要】 为探究钩藤(Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil.)组织培养与遗传转化适宜条件,以钩藤种子萌发的无菌苗叶片为外植体,筛选、优化钩藤再生体系建立条件.通过设置不同预培养时间、农杆菌浸染浓度、浸染时间、...
- 概要：
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- 结论：
【中文期刊】 温钦友 叶燕芳 等 《食品研究与开发》 2022年43卷19期 191-200页
【摘要】 为研究11种外源诱导物对丛毛红曲霉固态发酵产莫纳可林K(monacolin K,MK)的影响,以单因素试验为基础,对丛毛红曲霉的固态发酵条件进行响应面优化.单因素试验结果显示:谷氨酸、CaCl2、MgSO4·7H2O、ZnSO4·7H2O、...
- 概要：
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【中文期刊】 徐倩倩 马春桐 等 《中国酿造》 2022年41卷8期 97-104页
【摘要】 以具有几丁质降解能力菌株Chitiniphilus sp.LY72的裂解多糖单加氧酶(CsLPMO)为研究对象,在克隆CsLPMO全长基因的基础上对其进行生物信息学分析,利用3种表达质粒pET-22b、pET-28a和pCold,构建CsL...
- 概要：
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【中文期刊】 满在伟 崔慧慧 等 《食品研究与开发》 2022年43卷24期 181-187页
【摘要】 对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum)表达大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源海藻糖酶进行研究.构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.col...
- 概要：
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【中文期刊】 王玉波 邓炜杰 等 《江苏农业科学》 2022年50卷20期 212-216,252页
【摘要】 为提高抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量.采用液体培养基发酵培养能表达出目的蛋白的基因工程菌,对诱导表达得到的目标融合蛋白进行鉴定,探讨5种培养基、6种诱导时间和4种诱导剂-异丙基硫代半乳糖苷(IP...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 韩秀娥 秦兰霞 等 《中国食品学报》 2022年22卷4期 76-82页
【摘要】 为确定玉米谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母中的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体pPIC9K-TGZ经Sac I线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应扩增验证,甲醇诱导表达.通过正交...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李姣 林诗语 等 《四川师范大学学报（自然科学版）》 2022年45卷5期 683-687页
【摘要】 以雅连、味连和云连的茎段和叶片为外植体诱导愈伤组织,优化培养条件.结果表明:以带叶柄叶片为外植体愈伤组织诱导率最高,为87.5％;将外植体用乙醇(体积分数75％)浸摇30 s后用氯化汞(体积分数0.1％)浸摇10 min时雅连和云连外植体污...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 周晓旭 彭俊 等 《中国比较医学杂志》 2019年29卷10期 26-32页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 探讨TGF-β3、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cor...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 罗沈强 田长富 《中国药房》 2019年30卷12期 1634-1639页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:优化两种重组蛋氨酸酶表达的诱导条件,并探讨其对宣威人肺腺癌细胞GLC的抑制作用.方法:将重组蛋氨酸酶表达质粒PGEX-4T1-4A1-MGL和PGEX-4T1-3B8-MGL转染至感受态大肠杆菌DH5α中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张冀原 陈羽 等 《微生物学杂志》 2019年39卷2期 50-55页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以血管内皮生长因子单链抗体(pTA-anti-VEGF-scFv)为研究对象,考察不同培养基配方和培养条件对血管内皮生长因子单链抗体表达量的影响.经均匀设计试验,确定工程菌R22-4高效表达重组抗体的最佳培养基为以2×YT培养基为基础,添加...
【关键词】 血管内皮生长因子单链抗体；条件优化；大肠埃希菌；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 费迎心 陈豪 等 《微生物学杂志》 2018年38卷5期 78-83页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 优化抗肿瘤肽QX3-1融合蛋白在大肠埃希菌中的表达条件,提高表达量.从培养基、诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间4个单因素实验入手,优化QX3-1融合蛋白的表达条件,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和Band Scan凝胶分析软件分析Q...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 陈玲 陈依军 等 《中国药科大学学报》 2018年49卷3期 354-359页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为开发罗汉果苷ⅢE的简易制备方法,为开发罗汉果苷类甜味剂提供参考依据.本研究以罗汉果苷Ⅴ为探针筛选糖苷水解酶库,获得了能够区域选择性合成罗汉果苷ⅢE的CPU-GH17,通过考察异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导温度和时间等参数建立了C...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 邓英 唐兵 等 《西北植物学报》 2018年38卷2期 381-385页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 以‘贵阳小青瓜’(南瓜)未授粉子房为外植体,在离体条件下研究热激时间和TDZ浓度对胚状体诱导的影响.进一步优化试验步骤,探讨直接获得形成再生植株的方法,加速育种进程.结果表明:35℃高温黑暗培养5d后转入25℃光照培养90 d能直接形成再生...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 方志荣 周才懿 等 《广西植物》 2018年38卷9期 1172-1182页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 该研究以马铃薯'米拉'品种的脱毒试管苗为材料,采用"固液双层"的培养方式,通过正交试验对其试管苗壮苗生长阶段和试管薯诱导阶段的培养基进行优化,并通过单因素试验研究蔗糖浓度、光照条件和CCC浓度对试管薯结薯的影响.结果表明:在"固液双层"培养...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 栗亚美 陈阿娜 等 《生物学杂志》 2017年34卷1期 23-29页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 来自于酸性普鲁兰芽孢杆菌的普鲁兰酶，由于分子量较大，在大肠杆菌中难以实现高效分泌表达。为研究其在E．coli中高效分泌表达策略，构建了带信号肽的pET－28a（＋）-pelB-pul13A质粒，通过发酵过程控制及向发酵培养基中添加促分泌物质...
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- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 白少云 卿吉琳 等 《华中科技大学学报（医学版）》 2017年46卷3期 276-280,290页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建人可溶性Tim-3(sTim-3)的重组质粒表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增Tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 杨凯 李一鹏 等 《中国组织工程研究》 2016年20卷29期 4328-4333页ISTICPKUCA
【摘要】 背景：由于少突胶质细胞主要来自少突前体细胞，实验通过提取少突胶质前体细胞获取少突胶质细胞的过程中，选择合适的培养基和细胞接种密度对生长及形态学观察具有重要影响。目的：对比优化少突胶质细胞的培养条件。方法：取48 h内的SD新生鼠大脑皮质前体...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 祝明皓 陆涛峰 等 《中国实验动物学报》 2016年24卷3期 288-292页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的：获得巴马猪外周血淋巴细胞中NK细胞的表型及比例的数据，建立一种高效率猪CIK（ cyto-kine-induced killer）细胞体外诱导培养的方法。方法分离巴马小型猪外周血淋巴细胞，通过检测CD2＋／CD8＋／CD3－细胞以表征...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 胡田田 牛晓丽 等 《生态学报》 2015年35卷6期 1829-1836页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了研究湿度梯度对根系向水性反应的影响,采用Takahashi and Scott于1993年创建的方法,设置以下3个试验:1)向水性诱导物不同倾斜角试验;2)根系距向水性诱导物不同距离试验;3)根尖距底部饱和K2CO3溶液不同距离试验.同...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵乐 马利刚 等 《西北植物学报》 2015年35卷6期 1078-1084页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 病程相关蛋白(PR)的产生与积累是植物体应对生物或非生物胁迫的主要特征之一.该研究以人工培养的丹参幼苗为材料,通过分析丹参转录组数据,根据丹参病程相关蛋白基因PR10的序列设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从丹参中获得...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李国辉 范玉贞 等 《中国实验血液学杂志》 2014年22卷3期 807-811页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1.构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郑幸龙 向俊西 等 《中国组织工程研究》 2014年15期 2427-2433页ISTICPKUCA
【摘要】
背景：构建有效的血管系统对于三维结构组织内细胞的存活和功能表达均具有决定性作用。因此，寻找一种合适的血管化策略已成为组织工程领域研究的热点和亟待解决的问题。
目的：总结并讨论组织工程血管化的理论基础及研究进展。
方法：检...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 剧慧栋 李月颖 等 《微生物学杂志》 2014年34卷1期 53-57页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 根据GenBank报道的停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)isp基因(GenBank:CP002215.1)序列设计引物,PCR扩增得到isp基因.片段大小为1 500 bp,与从GenBank下载的序列进行...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 刘倩 陈龙龙 等 《中成药》 2014年36卷8期 1764-1767页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 研究野百合碱在5种不同肝微粒体中的体外代谢.方法 通过对肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等条件的考察优化野百合碱与肝微粒体的反应体系,用HPLC-MS定性/定量检测孵育体系中的野百合碱及代谢产物,分析比较野百合碱在经地塞米松诱导的F344大...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李倩 杨军 《中国组织工程研究》 2014年45期 7246-7249页ISTICPKUCA
【摘要】
背景：研究发现骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下能分化成神经元、神经胶质等神经细胞，这一定程度上解决了种子细胞来源的难题。目前采用的诱导方法各有不同，所诱导分化的效率也不尽相同。
目的：观察不同抗氧化剂体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 霍世元 朱文华 等 《中国免疫学杂志》 2013年29卷10期 1085-1088,1092页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建、表达、纯化抗血管内皮生长因子(VEGF)的Fab片段(眼明,Vasculizumab),并检测其抗VEGF的活性.方法:首先对轻链(LC)及重链(HC)基因进行密码子优化并做了全基因合成,将补充了OmpA信号肽核苷酸序列的轻链及...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李莲年 董秀涛 等 《微生物学杂志》 2013年33卷1期 30-34页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 毕赤酵母(Pichia pastoris)作为现在常用的基因工程菌株,常常会用其单倍体进行基因改良操作来达到基因工程菌株纯化的目的.在通过对毕赤酵母X-33培养过程中不同温度、碳源、盐离子及其浓度梯度等因素进行研究中,探讨其生孢诱导因子及其...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 宫苗苗 曾妮 等 《中国人兽共患病学报》 2013年29卷1期 17-22,26页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体.方法 为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李娟 王泽文 等 《西北植物学报》 2013年33卷11期 2147-2152页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 采用RT-PCR技术分离小麦Fe超氧歧化酶基因(FeSOD)的ORF全长cDNA,然后构建其原核表达载体,并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行优化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明:实验获得了小麦FeSOD基因的ORF全长(600...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郑晶 王明华 《海南医学院学报》 2012年18卷6期 736-739页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:对创伤弧菌溶细胞毒素融合蛋白表达条件进行优化,从而获得高效稳定的溶细胞毒素(Vibrio vulnificus Hemolysin,VVH)原核表达系统.方法:质粒pGEX-4T-1-vvh转化E.coli BL21/DE3后,针对诱...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 时兰春 王伯初 等 《西北植物学报》 2012年32卷5期 931-939页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 以转GFP-FABD2和GFP-MBD基因的拟南芥为材料,研究了GFP-FABD2和GFP-MBD这两种细胞骨架标记蛋白对拟南芥愈伤组织诱导、悬浮细胞培养及应激响应能力的影响.结果表明:(1)GFP-MBD标记蛋白延长愈伤的出愈时间,改变愈...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 陈倩 史庆华 《遗传》 2012年34卷3期 260-268页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 自2006 年Takahashi 和Yamanaka 首次成功地从小鼠成纤维细胞诱导得到诱导多能性干细胞(Inducedpluripotent stem cells,iPS 细胞)以来,iPS 细胞由于其潜在的广阔应用前景而迅速成为干细胞研...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
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