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【中文期刊】 王清龙 王瑞宁 等 《河南农业科学》 2023年52卷3期 127-134页
【摘要】 为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染...
【中文期刊】 王维荣 刘爱民 等 《生物化学与生物物理进展》 2000年27卷4期 407-411页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 青岛海葵中存在两种具有增强心肌收缩功能的多肽类毒素(分别命名为Ap-QD1和Ap-QD2).通过分析已经得到Ap-QD2的氨基酸序列,按照毕氏酵母的偏爱密码子设计并合成了Ap-QD2的cDNA.将合成cDNA序列通过PCR扩增及一系列分子克...
【关键词】 青岛海葵强心活性多肽； 毕氏酵母； 分泌表达；
【中文期刊】 王关林 易庆 等 《遗传学报》 2003年30卷2期 97-102页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2001.采用PCR技术人工合成了175 bp的人表皮生长因子(hEGF)的基因片段,并引入Pst Ⅰ、HindⅢ酶切位点、起始密码子及pUS186载体信号肽序...
【中文期刊】 李向茸 王兴陇 等 《生物学杂志》 2017年34卷5期 24-28页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础.从质粒pLV-CMV-EF1-GP-rIL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pcDNA3...
【中文期刊】 杜旭召 杨豪 等 《中国骨质疏松杂志》 2016年22卷11期 1375-1379,1385页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 研究白芍总苷(TGP)对人骨关节炎软骨细胞(HOCs)增殖、凋亡、分泌表达的影响及其作用机制,为白芍总苷在骨关节炎洽疗方面提供初步的实验依据.方法 组织块法培养原代人骨关节炎软骨细胞;TGP处理人骨关节炎软骨细胞并培养12、24和48...
【中文期刊】 孙楠 张荣光 等 《郑州大学学报（医学版）》 2016年51卷4期 478-481,482页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的：构建分泌表达幽门螺杆菌 lpp20基因的重组乳酸乳球菌菌株，并鉴定其免疫活性，为研究安全高效的幽门螺杆菌口服疫苗奠定基础。方法：采用 PCR 法从幽门螺杆菌基因组 DNA 中扩增 lpp20基因，将 lpp20先与 T 载体（pMD1...
【中文期刊】 卞曙光 陈华新 等 《水生生物学报》 2010年34卷6期 1091-1096页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 原核重组表达的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)溶菌酶蛋白主要以包涵体形式存在,经变性和复性处理后活性仍较差.研究将凡纳滨对虾溶菌酶基因(Lvlyz 基因)克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,电击转化毕赤酵母 G...
【中文期刊】 苏曼曼 陈月 等 《中国老年学杂志》 2009年29卷7期 841-843页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 在毕赤酵母中高效表达重组人载脂蛋白E3(rhApoE3),制备与天然hApoE3具有相同结构和活性的rhApoE3.方法 用RT-PCR法自人肝组织RNA克隆hApoE3的cDNA,构建真核分泌型表达载体pPICZα/hApoE3.经...
【中文期刊】 张红 张改平 等 《细胞与分子免疫学杂志》 2008年24卷3期 260-262页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×Hi...
【中文期刊】 吴琛 单耀军 等 《生物工程学报》 2008年24卷4期 558-562页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3.采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGF...
【关键词】 胰岛素样生长因子结合蛋白3； 真核分泌表达； 人肾癌细胞；
【中文期刊】 周鹤峰 邵敏 等 《中国生物工程杂志》 2008年28卷3期 20-24页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵...
【中文期刊】 孙玉成 周凤秋 等 《生物工程学报》 2008年24卷9期 1620-1624页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY.PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切...
【中文期刊】 沙建平 薛耀明 等 《南方医科大学学报》 2008年28卷7期 1203-1206页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物试验.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点处...
【中文期刊】 邓晓洁 胡宗利 等 《中国组织工程研究与临床康复》 2008年12卷40期 7884-7887页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:RANTES是典型的趋化性细胞因子,参与很多炎症反应以及器官移植免疫排斥反应.从天然组织中分离RANTES数量有限,难以满足对其生物学功能研究和临床应用的需要;运用基因工程方法生产RANTES具有一定的应用价值.目的:观察人体趋化因子...
【中文期刊】 高雯 吴远征 等 《微生物学报》 2008年48卷2期 239-243页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 根据从GenBank中检索到的木霉菌β-1,3-葡聚糖酶基因序列设计引物,以高产β-1,3-葡聚糖酶菌株--绿色木霉LTR-2的cDNA为模板,采用PCR方法扩增得到内切β-1,3-葡聚糖酶基因(glu).将glu克隆至载体pMD18-T上...
【中文期刊】 王秀青 苏春霞 等 《微生物学报》 2007年47卷1期 75-78页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 根据抗菌肽天蚕素A(cecropinA,CA)N端第1～7个氨基酸残基,马盖宁(magainin,M)N端第2-12个氨基酸残基,以毕赤酵母偏爱的密码子设计合成了杂合肽CA(1～7)-M(2～12)基因,同载体pPICZα-A连接后转化Pi...
【关键词】 杂合抗菌肽CecA-Mag； Pichia pastoris； 分泌表达；
【中文期刊】 王蒙 杨媛 等 《第三军医大学学报》 2007年29卷6期 494-497页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 研究在毕赤酵母(Pichia Pastoris)系统中人TALL-1基因的分泌表达,获得具有生物活性的重组TALL-1.方法 将人TALL-1基因插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的酵母表达载体pPIC9K中,用Sac Ⅰ将重组质...
【中文期刊】 吴晓萍 曾耀英 等 《中国生物工程杂志》 2007年27卷3期 1-5页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经Pme Ⅰ线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同...
【中文期刊】 张卉 袁其朋 《生物工程学报》 2007年23卷3期 381-385页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 根据已知hepeidin氨基酸序列,参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,设计合成了hepcidin目的基因.所合成的hepcidin基因全长96bp,其5'端引入KEX2基因产物(Kex2)的特异性识别位点序...
【中文期刊】 陈俊杰 孔祥平 等 《中国生物工程杂志》 2007年27卷6期 22-26页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 肝再生增强因子(ALR)是一类胞源性肝细胞生长因子.为在毕赤酵母中分泌表达人肝再生增强因子(rhALR),以色谱法分离纯化后进行体外活性研究,构建表达载体pPICZαA-ALR,经电穿孔转入毕赤酵母中,用0.5%甲醇诱导表达;重组酵母培养上...
【中文期刊】 马江涛 卢曾军 等 《生物工程学报》 2007年23卷3期 540-545页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC.将该重组质粒与杆状病毒骨架DNA Bac-N-Blu...
【中文期刊】 牛明福 李翔 等 《生物工程学报》 2007年23卷3期 418-422页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了获得抗菌活性较强的抗菌肽,将几种抗菌肤串联起来在毕赤酵母中表达,并比较其与单独抗菌肽的抑菌活性.以GenBank中的Protegrin-1(PC,-1)、Scorpion Defemin(SD)、Metalnikowin-2A和Shee...
【中文期刊】 王丁丁 包晓群 等 《中国老年学杂志》 2007年27卷8期 720-722页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 经分步整合法在巴氏毕赤酵母中表达人抗狂犬病毒全分子抗体.方法 分别构建人重链和轻链抗体表达质粒,以分步整合法电转化X33酵母菌,甲醇诱导表达后进行ELISA筛选及Western blot分析.结果 SDS-PAGE、Western b...
【中文期刊】 李雪莲 马一君 等 《郑州大学学报（医学版）》 2007年42卷1期 127-130页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达.方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插人大肠杆菌-酵母细胞穿...
【关键词】 人铜锌超氧化物歧化酶； 酿酒酵母； 分泌表达；
【中文期刊】 王丁丁 许天敏 等 《吉林大学学报（医学版）》 2007年33卷6期 963-967页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:利用毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体分泌表达文库获得具特异性狂犬病毒抗原结合活性的分泌型小分子抗体(scFv-Fc).方法:RT-PCR方法扩增获得一组轻链和重链可变区基因.利用重叠延伸PCR方法组装scFv基因后克隆入毕赤酵母scFv-Fc...
【中文期刊】 姚冬生 谭慧媚 等 《中国生物工程杂志》 2006年26卷4期 58-64页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 假密环菌是一种果树腐病菌,具有较强的分解代谢纤维素的能力.根据已克隆出的阿拉伯糖苷酶基因序列(Accession Number AJ620046)设计引物从假密环菌的mRNA中克隆出阿拉伯糖苷酶的ORF片段,构建重组质粒pPIC9-AF,与...
【中文期刊】 谭慧芳 张国青 等 《微生物学通报》 2006年33卷6期 68-73页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母(Pichia pas...
【中文期刊】 龙良鲲 邓名荣 等 《微生物学通报》 2006年33卷5期 65-69页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将植物防御素PD5基因克隆到载体pPIC9的Xhol Ⅰ和EcoR Ⅰ位点之间,得到重组载体pPIC9/PD5.pPIC9/PD5经Bgl Ⅱ线性化,电转化法转入Pichia pastoris GS115,MD和MM平板筛选表型为His+M...
【中文期刊】 姜丽华 卢海蓉 等 《生物工程学报》 2006年22卷6期 1036-1039页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 PBD-1是猪防御系统起重要作用的抗菌小肽,为实现其在毕赤酵母中的表达,根据已发表的猪β防御素1(PBD-1)氨基酸序列和酵母偏好密码子,用PCR方法获得PBD-1基因,克隆到分泌型表达载体pPIC9K信号序列α因子之后,构建重组表达质粒p...
【中文期刊】 高彦茹 潘善培 等 《生物工程学报》 2006年22卷3期 499-503页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为制备rpZP3α蛋白供发展避孕疫苗研究,将编码天然提取pZP3α上的DNA序列(446～1423)插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA上,重组质粒pPICZαA-pZP3α线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115,经抗生素Zeoci...
【中文期刊】 彭其胜 李月红 等 《微生物学通报》 2006年33卷2期 74-80页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将IL-1023-57-PE40基因与pelB信号肽融合置于pET-20b构建分泌表达质粒pET-20bIL-1023-57-PE40,然后将pET-20b-IL-1023-57-PE40分别转化至B121(DE3),BL21(DE3)pL...
【关键词】 IL-1023-57-PE40 重组毒素； 分泌表达； 质粒稳定性；
【中文期刊】 杨毅 张敏 等 《生物工程学报》 2006年22卷6期 973-978页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了将可中和对虾白斑综合症病毒(WSSV)的单链抗体P1D3在酵母中实现表达,以原核表达载体M13噬菌粒为模板,设计带有SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物,通过PCR方法扩增P1D3基因.经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌-酵母...
【关键词】 毕赤酵母； 对虾白斑综合症病毒(WSSV)； 单链抗体；
【中文期刊】 曹瑞兵 周国栋 等 《微生物学报》 2006年46卷3期 412-417页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 为了研制高活性的重组猪β干扰素,对PoIFN-β成熟蛋白第3、7和164位的3个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏嗜性改造并构建了酵母表达载体pPICZαA-PIB.pPICZαA-PIB经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33.多株P...
【中文期刊】 侯本祥 王慧 等 《细胞与分子免疫学杂志》 2006年22卷3期 399-401页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:在酵母系统中实现可溶性CD14基因的分泌表达,并进行LPS结合活性分析.方法:将可溶性CD14基因克隆入表达载体pPIC9K,用SacⅠ将重组质粒线形化,电转化Pichia pastoris GS115细胞,筛选阳性整合子并进行甲醇诱...
【中文期刊】 孙勇 彭曦 等 《第三军医大学学报》 2006年28卷6期 527-530页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础.方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF.BspH I线性化后氯化锂转化...
【中文期刊】 王宏 金宁一 等 《生物工程学报》 2005年21卷3期 473-477页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以pPIC9K为载体,构建抗HIV-1gp120单链抗体scFv120与葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G...
【中文期刊】 何正祥 张部昌 等 《生物学杂志》 2005年22卷2期 15-17,20页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 在大肠杆菌周质中分泌表达rhGH既有利于消除其在临床应用上的抗原性又有利于提取纯化,在rhGH的发酵生产中越来越受到青睐.就rhGH在大肠杆菌中的分泌表达机制以及启动子、引导序列、宿主菌、培养基和培养条件对分泌表达效率的影响等方面进行了综述...
【中文期刊】 王慧 荫俊 等 《微生物学通报》 2005年32卷2期 50-53页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将特异肉毒抗毒素基因克隆入载体pPIC9k,G418抗性加压筛选阳性整合克隆,在毕赤酵母细胞GS115中进行分泌表达.获得了稳定分泌表达ScFv的工程菌,SDS-PAGE分析可见,目的蛋白分子量约为26 kD,通过放大体积来探索重组抗毒素的...
【中文期刊】 杨小柯 陈小佳 等 《中国生物工程杂志》 2005年25卷5期 45-49页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 CHO细胞在无血清或无蛋白培养条件下培养通常会遇到贴壁能力差,细胞活力差等问题.通过构建分泌型bFGF基因,克隆到pIRESneo3表达载体上,转染CHO细胞,通过MTT法间接检测细胞培养上清中bFGF表达,并在无蛋白培养基中观察细胞的生长...
【中文期刊】 赵春田 彭远义 等 《菌物学报》 2005年24卷3期 360-366页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 运用同源重组技术破坏了黑曲霉基因组中的pepD基因,该基因编码一种类subtilisin的胞外蛋白酶PEPD.实验以黑曲霉GICC2773基因组DNA为模板,PCR扩增pepD基因,并在此基因中间插入潮霉素抗性基因(hph)表达单元,由此产...
【中文期刊】 张素芳 曹瑞兵 等 《微生物学报》 2005年45卷2期 218-222页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,改造并化学合成杂合抗菌肽CecA-mil基因,改造后的CecA-mil基因克隆到pPICZα-A载体中,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-CM,转化Pichia p...
【中文期刊】 马兴元 谭建华 等 《中国生物工程杂志》 2005年25卷7期 54-60页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达.设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1.8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达载体pHIL...
【中文期刊】 张银波 江木兰 等 《微生物学报》 2005年45卷4期 625-629页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 采用RT-PCR技术克隆到一个平菇(Pleurotus ostreatus)漆酶基因的全长cDNA,命名为lccPo1,其序列提交GenBank,登录号为AY450404.将其ORF克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906,转化3株毕赤酵母GS...
【中文期刊】 郭晨云 郝志波 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2005年25卷5期 397-402页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中....
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