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【中文期刊】 季朝能 张冰 等 《遗传学报》 2000年27卷12期 1100-1107页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 通过对耐热碱性磷酸酯酶TAPND27活性位点S(69)两侧的E(68)和S(70)的定点突变,得到了3个突变子E68S、S70A和E68SS70A。在蛋白纯化的基础上测定了3个变体的一些酶学性质,与TAPND27相比,E68S的比活力上升了...
【中文期刊】 胡培静 杜媛 等 《西安交通大学学报(医学版)》 2015年4期 435-438,443页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建并验证 Brugada 综合征相关钠通道 SCN5a 基因 R104W 突变体。方法采用一步法 PCR 突变技术,以 pEGFP-SCN5a 为模板,体外定点诱变构建 pEGFP-SCN5a-R104W 突变体,进行基因测序,并用...
【关键词】 钠通道; R104W 突变; Brugada 综合征;
【中文期刊】 史丙俊 江阳 等 《中国皮肤性病学杂志》 2013年27卷1期 29-32页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 利用大引物PCR技术对发现的中国人Darier病ATP2A2基因A68E突变进行体外定点诱变,并构建携带有突变基因的真核表达载体.方法 首先设计三条引物(包括两条外侧正向和反向引物以及内部突变引物),通过2轮PCR扩增,扩增出含有所需...
【中文期刊】 张晓刚 周明 等 《武汉植物学研究》 2006年24卷3期 191-195页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 为了研究藻蓝蛋白β亚基Cys-84裂合酶CpeS结构与功能的关系以及色氨酸残基对于该酶功能的影响,构建了藻蓝蛋白β亚基Cys-84裂合酶CpeS的两个色氨酸突变体,分别为CpeS(W14I) 和CpeS(W75S).通过体内重组检测酶活性的...
【中文期刊】 胡明 卢雪梅 等 《中国生物工程杂志》 2003年23卷3期 30-34页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 综述了木素降解的关键酶之一锰过氧化物酶的三维分子结构和催化反应性能,综合概述了通过定点诱变等方法对锰过氧化物酶的结构和功能的研究进展.
【中文期刊】 易绍东 孟素荣 等 《第一军医大学学报》 2003年23卷11期 1139-1142页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的对我们发现的中国人Brugada综合征新的SCN5A基因突变K317N进行体外定点诱变研究,并构建携带有基因突变K317N的pRc/CMV-hH1的表达载体.方法采用PCR定点突变技术,根据突变位置附近的两个单一限制性内切酶位点Age ...
【中文期刊】 于洪枫 曾瑞萍 等 《中山医科大学学报》 2002年23卷2期 105-107页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [目的] 构建突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因(IDUA)cDNA,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础.[方法] 以野生型pcDNA3-IDUA为基础质粒,采用双引物法体外定点诱变技术,引入突变E404X.[结果] 突变区域经PCR-SS...
【关键词】 诱变,定点; α-L-艾杜糖醛酸酶; 基因,IDUA;
【中文期刊】 刘相梅 祁蒙 等 《生物工程进展》 2001年21卷2期 28-31页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 木聚糖酶专一性水解木聚糖分子中β-1.4-糖苷键,在制浆造纸、食品、纺织、饲料、能源工业中具有广阔的应用前景.随着各种新技术的发展与应用,木聚糖酶基因的研究取得了很大进展,不仅克隆了许多不同来源的木聚糖酶基因,研究了木聚糖酶基因在同源和异源...
【中文期刊】 田红 孙竞 等 《中国实验血液学杂志》 2000年8卷2期 90-92页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 本实验通过合成与原有下游引物(B)相似的一条新引物(B'),经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出比原BCR-ABL cDNA序列减少了4个碱基的参照物,达到定点诱变的目的.经酶切分析证明,两型B...
【中文期刊】 邓飞涛 孟元普 等 《医学分子生物学杂志》 2013年10卷6期 328-331页 ISTICCA
【摘要】 目的 制备TTF-1相关蛋白26(TAP26)的3个磷酸化位点(S48,S66和T219)的突变体(TAP26(S48→A48)、TAP26(S66→A66)和TAP26(T219→V219)).方法 采用定点诱变PCR技术,分别突变掉TA...
【中文期刊】 潘艺 汤立军 《生命科学研究》 2012年16卷3期 212-214页 ISTICCA
【摘要】 通过改良PCR介导的定点诱变技术,经济且高效地对ApoM基因-778位点进行定点诱变,并运用萤光素酶报告系统检测其启动子活性的变化,探讨ApoM基因-778位点在ApoM基因启动子区域的作用.研究发现ApoM基因-778突变型片段启动子活性...
【关键词】 载脂蛋白M; PCR介导定点诱变技术; 萤光素酶活性分析;
【中文期刊】 王银 李云鸿 等 《宁夏医科大学学报》 2011年33卷7期 609-611,618页 ISTIC
【摘要】 目的 研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变.方法 将PrC/CMV - HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点...
【中文期刊】 邓飞涛 柴新群 等 《中国优生与遗传杂志》 2008年16卷3期 33-35,44页 ISTIC
【摘要】 目的 研究多形性腺瘤样因子2(pleiomorphic adenoma gene like-2,PLAGL2)对肺表面活性蛋白C基因(surfactant protein-C,SP-C)表达的影响及调控机制.方法 通过定点诱变技术分别突变掉...
【中文期刊】 龙跃生 蔡阳林 等 《激光生物学报》 2008年17卷6期 824-828页 ISTICCA
【摘要】 目的:利用结合单酶切位点的融合PCR技术对癫痫相关基因SCNIA进行定点突变.方法:首先设计两对引物PF1/PR1和PF2/PR2,PF1和PR2均位于突变位点最近的单酶切位点处,而突变位点设计在第一对反向引物(PR1)和第二对正向引物上(...
【中文期刊】 程烽 盛燕 等 《癌变·畸变·突变》 2007年19卷1期 8-10页 ISTICCA
【摘要】 背景与目的:构建UGRP1基因启动子的定点突变表达载体.材料与方法:以插入UGRP1基因正常启动子的质粒pGL3-UGRP1(-112G)为模板,用重叠延伸PCR定点诱变技术,对-112位点的碱基进行定点突变,并构建定点突变表达载体.结果:...
【关键词】 子宫球蛋白相关蛋白1基因(UGRP1); 启动子; 重叠延伸PCR;
【中文期刊】 蔡阳林 龙跃生 等 《广州医学院学报》 2007年35卷2期 62-64页 ISTIC
【摘要】 目的:利用长距离PCR定点突变技术对GEFS+致病相关基因SCN1A进行定点诱变.方法:在突变位点处设计一对延伸方向相反的引物,通过长距离 PCR扩增,得到携带突变位点的新质粒;然后用Dpn I酶切去掉母质粒;再转化至大肠杆菌进行克隆.结果...
【中文期刊】 钟长青 智发朝 等 《胃肠病学》 2007年12卷6期 331-334页 ISTICCA
【摘要】 背景:NOD2/CARD15基因序列单核苷酸多态性(SNP)与欧美人群的克罗恩病(CD)明显相关,其中R702W、G908R和3020insC 3个SNP位点与CD的相关性尤为显著.而日本、韩国以及我国香港和浙江地区的研究均未发现上述3个S...
【关键词】 基因,NOD2/CARD15; 诱变,定点; 转染;
【中文期刊】 刘玉冰 李晓霞 等 《天津医科大学学报》 2007年13卷1期 98-99页 ISTIC
【摘要】 <篇首> 定点诱变技术广泛应用于基因工程和蛋白质工程,常用的方法有化学诱变、寡核苷酸介导的诱变,盒式诱变和基于PCR的诱变,其中基于PCR的诱变包括重叠延伸PCR(over-lap extension PCR,OEPCR),大引物PCR(meg...
【中文期刊】 田亚萍 张培因 等 《医学分子生物学杂志》 2004年1卷1期 10-14页 ISTICCA
【摘要】 目的定点诱变热休克蛋白-乳头瘤病毒表位融合蛋白的基因中编码半胱氨酸的密码子,解决下游纯化工作中产生多聚体蛋白的问题.方法在对蛋白质序列进行计算机表位预测及生物学特性分析的基础上,利用PCR的定点诱变技术,使原始基因序列中编码半胱氨酸的TGC...
【关键词】 乳头瘤病毒表位融合基因; 定点诱变; 表位预测;
【中文期刊】 陈春华 曹英林 等 《癌变·畸变·突变》 2003年15卷1期 10-12页 ISTICCA
【摘要】 目的:为研究载脂蛋白CⅡ启动子-190处的碱基突变对其转录活性的影响,构建带有突变的载脂蛋白CⅡ启动子的表达载体. 方法:以插入有正常ApoCⅡ启动子的质粒pGL 3为模板,设计一对带有预期突变的完全互补的引物,利用Stratagene的定...
【中文期刊】 陈春华 曹英林 等 《中国动脉硬化杂志》 2003年11卷6期 509-511页 ISTICCA
【摘要】 为探讨载脂蛋白CⅡ基因启动子区-190 bp处的碱基突变(T→A)对载脂蛋白CⅡ基因转录的影响,及其与血浆载脂蛋白CⅡ浓度降低的关系.通过定点诱变技术构建带有-190 bp处 T→A突变的载脂蛋白CⅡ启动子的荧光素酶表达载体pGL3;应用脂...
【关键词】 分子生物学; 载脂蛋白CⅡ启动子突变对转录的影响; 定点诱变;
【中文期刊】 董军 黄强 等 《江苏医药》 2001年27卷11期 813-815页 ISTICCA
【摘要】 目的抗胶质瘤单克隆抗体建株初期效价为1:105,经长期传代培养后效价下降至低于1:104,为探索其分子机制并将其改造为有活性的单链抗体,为构建靶向基因转移载体奠定基础.方法通过RT-PCR克隆该单抗可变区基因,发现轻链可变区CDR1区出现一...
【中文期刊】 王秀宏 高旭 等 《哈尔滨医科大学学报》 2000年34卷3期 165-167页 ISTICCA
【摘要】 目的验证血红素加氧酶-1(HO-1)中的第39位赖氨酸(K39)对电子传递的影响.方法通过定点诱变将K39置换为酸性氨基酸谷氨酸(E),并将得到的变异型酶基因克隆到高度表达的载体上表达,提纯变异型HO,测定其活性,比较变异型酶与野生型酶的活...
【中文期刊】 苏建臣 邴雷 等 《河北师范大学学报(自然科学版)》 2009年33卷6期 810-814页
【摘要】 通过对抗菌肽Protegrin成熟肽的氨基酸组成和作用机理分析,并根据已报道的Protegrin基因序列设计引物,PCR扩增获得定点诱变的突变体基因pg-g,其编码蛋白的末端相对于野生型增加1个非极性氨基酸Gly.利用表达载体pET-28a...
【中文期刊】 张晓玮 崔文涛 等 《畜牧兽医学报》 2009年40卷11期 1588-1593页
【摘要】 本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性.以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序.再将...
【中文期刊】 申晓靖 段广才 等 《河南医学研究》 2005年14卷2期 100-103页 CA
【摘要】 目的:大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)是很强的免疫原,也具有很强的粘膜免疫佐剂作用,但LT的毒性限制了它在人类疫苗中使用.本研究希望通过定点诱变构建无毒或减毒并保持LT免疫学特性的突变体.方法:以人源肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株E.coli ...
【中文期刊】 陈德富 陈喜文 等 《南开大学学报(自然科学版)》 2004年37卷3期 109-114,119页
【摘要】 阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶.采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟,然后将其插入表达载体pET21b(+),并在大肠杆菌中表达.表达的蛋白特性研...
【中文期刊】 裴子飞 刘映乐 等 《科学通报》 2003年48卷5期 452-456页
【摘要】 海灰翅夜蛾核型多角体病毒(SlNPV)的p49基因, 可抑制病毒感染引起的昆虫细胞Sf 9的凋亡. 用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统表达的P49蛋白可抑制Caspase的活性. 通过氨基酸序列测定发现, P49蛋白的91~95位的氨基...
【中文期刊】 马兴元 郑文云 等 《中国预防兽医学报》 2002年24卷6期 427-431页
【摘要】 为使大肠杆菌热敏毒素LT的毒素活性丧失的同时仍保留其较强的免疫原性,实验依据LT基因的同源序列设计并合成5条引物,采用突出末端PCR法和重组PCR法,将克隆于质粒pEWD299上的LT基因,分别引入BamHI、Ndel和xhol等位点,扩增...
【中文期刊】 马兴元 赵玉军 等 《动物医学进展》 2001年22卷2期 7-10页
【摘要】 本文在分析大肠杆菌热敏毒素(LT)生物学特性及其分子学水平研究的基础上,从蛋白质和基因水平阐述了猪源LT与人源LT的亲缘关系,评述了LT在研制人畜大肠杆菌腹泻疫苗中的应用价值,也通过对与LT具有相似蛋白和基因结构的霍乱毒素CT的分析,表明二...
【中文期刊】 唐丽 朱武洋 等 《病毒学报》 2010年26卷2期 121-127页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为观察nsP2-726Pro定点诱变对辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)XJ-160复制子载体特性的影响,以XJ160病毒复制子载体pBRepXJ为分子基础,利用定点诱变方法分别构建突变载体pBRep-726L、pBRep...
【中文期刊】 莫凌 张文宏 等 《中华传染病杂志》 2004年22卷2期 94-97页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的探讨过氧化氢酶编码基因(KatG)基因点突变和结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药性之间的关系,筛选相关位点用于筛查临床INH耐药株基因型.方法采用三步法聚合酶链反应(PCR)对临床耐异烟肼菌株中发现的6个位点进行定点诱变,用含诱变基因的p...
【中文期刊】 赵小娟 王兆钺 等 《中华血液学杂志》 2003年24卷9期 480-483页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的探讨糖蛋白(GP)Ⅸ基因点突变G2113→A在导致巨血小板综合征(BSS)中的意义.方法用限制性内切酶分析患者和其直系亲属以及40名正常人等位基因;采用定点诱变技术构建含有GPⅨ点突变G2113→A的质粒PD-ⅨG2113A;用含有GP...
【中文期刊】 赵卫 胡志君 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2001年21卷6期 662-665页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的对带有登革2型病毒(DEN-2)全长cDNA的质粒pDVWS501上E62、E203位点进行定点诱变. 方法设计4对点诱变引物,运用OL-PCR(overlap PCR)法,扩增出分别在E62或E203位带有点突变的2条DNA片段,克隆...
【中文期刊】 陈锐 王利锋 等 《中国生物制品学杂志》 2017年30卷4期 424-428页 ISTICCSCDCABP
【摘要】 目的 将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子.方法 采用同源序列对比、空间结构...
【中文期刊】 崔颖鹏 陈培松 等 《中华生物医学工程杂志》 2015年2期 134-137页 ISTICCA
【摘要】 目的:在PRShGRα质粒的基础上构建人糖皮质激素受体的M565R、C638S、L753F、A573Q、GR2439insA诱变表达受体,为研究糖皮质激素抵抗的分子机制打下基础。方法采用Stratagene公司生产的QuickChange定...
【中文期刊】 莫秋华 徐湘民 等 《中华医学遗传学杂志》 2002年19卷1期 68-71页 MEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 目的建立一种改进的、简便易行的大引物PCR定点诱变技术.方法在两轮PCR中设计了两种不同的质粒DNA模板,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增...
【中文期刊】 于晓淼 赵允章 等 《微生物学杂志》 2023年43卷2期 21-27页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 纳豆激酶(Nattokinase,NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs).然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究.使用重叠延伸PCR法将NK中位于194 ...
【中文期刊】 宋春林 张雨晴 等 《精准医学杂志》 2023年38卷3期 254-258,263页
【摘要】 目的 探讨建立一种体外定点突变体或CRISPR/cas9介导的敲入突变体的快速筛选方法,以提高突变体筛选效率,降低实验成本.方法 针对构建的体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体,采用3'端第1、2和3个核苷酸分别与突变序列...
【中文期刊】 刘晶 尹长城 等 《生物化学与生物物理进展》 2001年28卷5期 756-760页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一.利用巨型引物PCR定点诱变方法,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段,即巨型引物,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯...
【中文期刊】 宋立先 刘春红 等 《安徽农业科学》 2022年50卷20期 76-80页
【摘要】 [目的]引进犬MC4R突变点,构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达.[方法]设计带突变点D298N引物,以犬MC4R基因组DNA为模板,采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区,将产物克隆、酶切、测序鉴定.将测序正...
【中文期刊】 简丽 赵启全 等 《中国病理生理杂志》 2016年32卷11期 2073-2078页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的::评价金黄色葡萄球菌多药耐药主动外排蛋白QacA α-螺旋1和2及跨膜区(TMS)1上的氨基酸对于底物转运的重要性。方法:采用半胱氨酸定点诱变的方法诱变QacA蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸I2、S3、F4、F5、T6、K7、...
【中文期刊】 强华 孙超峰 等 《西安交通大学学报(医学版)》 2009年30卷4期 405-410页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 通过构建Cav1.3基因K228E突变,观察K228E突变对L-型钙通道电生理特性及蛋白表达和转运的影响.确定钙通道α1亚基结构域ⅠS4段上N-端带正电荷的氨基酸对该通道电生理学特性的作用,从而为创建钙通道起搏器奠定基础.方法 ①一步...
【中文期刊】 周俊 陆国平 等 《中国组织工程研究与临床康复》 2007年11卷6期 1075-1079,插2页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:观察离体血管平滑肌细胞和动物体内转染转录因子核因子κB p65诱骗性寡核苷酸和反义寡核苷酸对平滑肌细胞增殖及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的干预作用.方法:实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞...
【中文期刊】 丰岩清 李洵桦 等 《中山大学学报(医学科学版)》 2005年26卷5期 541-544,577页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [目的]应用CCC2基因缺陷型酵母研究中国人Wilson病(Wilson disesse,WD)突变热点Arg778Leu的致病性,在蛋白水平上探讨中国人Wilson病的发病机制.[方法]应用RT-PCR和TOPO TA克隆技术分段克隆AT...
【中文期刊】 黄俏佳 兰风华 等 《中国生物化学与分子生物学报》 2005年21卷6期 781-785页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 SRP54蛋白是信号识别颗粒(signal recognition particle)的一个~330位的TLR 3个氨基酸进行人工诱变,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达了A3突变体,并对A3突变体进行纯化和Superdex75凝...