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【中文期刊】 王柳月 李慧美 等 《生物技术通报》 2019年35卷12期 196-202页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 平行模板法简化重叠延伸PCR定点突变流程的思路不能成立,靠近DNA末端的低效限制性酶切才是制约其突变效率的核心原因.故以旁侧引物法提高DNA产物的酶切效率,增加定点突变的成功率.将上、下游引物匹配位点由两侧酶切位点外延50-100 bp,使...
- 概要：
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【中文期刊】 杨柳 汪小菀 等 《吉林大学学报（医学版）》 2015年41卷3期 656-661页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建pGEX-4T-1/ hZimp10重组质粒,并在大肠杆菌中表达,纯化出GST-hZimp10融合蛋白,用以制备抗hZimp10抗体.方法:采用PCR技术以pcCDNA3.1-Flag-hZimp10为模板,扩增出hZimp10蛋...
【关键词】 hZimp10；谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白；多克隆抗体；
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【中文期刊】 刘彤 李洋 等 《吉林大学学报（医学版）》 2013年39卷3期 437-440页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据.方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段....
- 概要：
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【中文期刊】 李锐 王文国 等 《中国生物工程杂志》 2012年32卷8期 30-35页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 对金发草(Pogonatherum paniceum)第3组LEA蛋白(PpLEA3)基因两个剪接体进行分析,并利用酿酒酵母表达系统分析两个剪接体在不同非生物胁迫的响应差异.以PpLEA3基因两个剪接体(PpLEA3.a和PpLEA3.b)...
- 概要：
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【中文期刊】 肖智 吴炜 等 《细胞与分子免疫学杂志》 2012年28卷10期 1064-1066页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建HPC2不同截短功能片段的真核表达载体,并检测各片段在骨肉瘤U2OS细胞中的表达.方法:以质粒pcDNA3.2-V5/HPC2为模板,分别设计各片段PCR引物进行扩增,EcoR I酶切鉴定PCR产物,正确的PCR产物进行连接后转化...
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【中文期刊】 郑英 盛树东 等 《细胞与分子免疫学杂志》 2012年28卷6期 626-628页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用.方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质...
【关键词】 NYD-SP28基因；原核表达；多克隆抗体；
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【中文期刊】 杨公进 马中瑞 等 《中国生物工程杂志》 2011年31卷10期 83-87页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:利用λ噬菌体Red重组系统敲除大肠杆菌O157∶H7的waaL基因.方法:以pKD4为模板扩增出与waaL基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的PCR产物.然后电击转化到大肠杆菌O157∶H7中,利用Red重组系统,通过卡那霉素抗性...
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【中文期刊】 夏嵩 张成武 《中国生物工程杂志》 2011年31卷5期 126-130页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 硅藻是一类微小的单细胞藻类,具有由无定形氧化硅组成的坚硬细胞壁(硅壳).硅壳具有精致的形态和结构,且随硅藻种类和生长条件不同而千变万化.目前估算的硅藻种类超过200 000种,其独特的纳米结构对光子结构、化学生物传感器、新纳米材料和器件的开...
- 概要：
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【中文期刊】 马小松 刘金钊 等 《中国矫形外科杂志》 2011年19卷10期 851-854页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [目的]构建骨形态发生蛋白BMP2和转化生长因子TGFβ3双基因真核表达载体.[方法]从人胚胎组织提取总RNA,反转录成cDNA,以pGEMT/BMP2和反转录的cDNA为模板,PCR扩增出BMP2和TGFβ3两个基因全长,将两个基因片段分...
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【中文期刊】 郝欣 肖冬光 等 《微生物学报》 2010年50卷8期 1030-1035页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 [目的]通过构建酿酒酵母类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失的工程菌株,研究该基因对酿酒酵母浓醪发酵产高级醇特别是异戊醇的影响.[方法]以酿酒酵母工业菌株AY-15的单倍体a-8或α-22的基因组DNA为模板,PCR分别扩增YDL080...
【关键词】 酿酒酵母；类丙酮酸脱羧酶；类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)；
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【中文期刊】 张巧 段丽菊 等 《卫生研究》 2010年39卷4期 403-406页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 了解Rap2b基因对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据.方法 以人肺CDNA为模板克隆出Rap2b基因片段,构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,稳定转染NIH3T3...
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【中文期刊】 石欣 高乃荣 等 《中华肝胆外科杂志》 2007年13卷1期 38-40页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 探讨CDC25B基因在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达,以探讨其在HCC发生和发展中的作用.方法 联合应用激光显微切割和实时定量PCR技术检测24例正常肝脏组织和24例HCC组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较C...
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【中文期刊】 张敏 辛绍杰 等 《中华检验医学杂志》 2007年30卷4期 444-446页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 建立单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行4处点突变,并与传统环状突变法进行对比.方法 将变异点合成在一对互补引物中,先加入单条引物行PCR扩增,再以产物为模板,加入另一单条引物行PCR扩增.PCR产物加入Dpn Ⅰ酶,...
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【中文期刊】 赵红萍 吴补领 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2006年26卷5期 409-413页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因(gbpD)失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究.方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶...
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【中文期刊】 向军 王西樵 等 《中华烧伤杂志》 2005年21卷1期 52-54页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的观察真皮模板对深度烧伤创面愈合过程中转化生长因子(TGF)β1及其受体和信号转导蛋白Smad 3表达的影响. 方法 20例烧伤患者四肢Ⅲ度创面切痂后分为两部分,进行同体对照试验:其一移植真皮模板(异体脱细胞真皮基质)+自体刃厚皮片,设为...
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【中文期刊】 张昭秀 陈元仲 等 《中华血液学杂志》 2003年24卷12期 666-667页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 <篇首> 利用荧光TaqMan技术(5′核酸外切酶活性)和一种可以实时检测荧光信号的仪器(ABI Prism 7700序列检测系统),在PCR反应完全封闭的情况下可实时检测PCR扩增的动力学变化,能够对标本扩增过程中的起始拷贝数快速、准确地定量...
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【中文期刊】 姜拥军 尚红 等 《中华检验医学杂志》 2002年25卷5期 296-298页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的动态检测人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因gag、env、rev mRNA水平.方法将插入有HIV-1竞争模板的pSPI质粒DNA转化入感受态菌STBL-2,进行扩增.以T7 RNA聚合酶体外转录出HIV-1 mRNA竞争模板.用3对...
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【中文期刊】 魏来 封波 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2002年22卷1期 16-19页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的以聚合酶链反应(PCR)突变方法诱导丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性位点ser1165的突变,获得全长非结构基因3(NS3)/4a的表达与纯化. 方法分别以NS3 N端正向引物与诱变反向引物,诱变正向引物与NS4a C端反向引物获得2个...
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【中文期刊】 仇润祥 扈廷茂 等 《遗传》 1999年2期 1-6页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 根据番茄ACC合成酶基因(LE-ACC2)DNA序列,以番茄(Lycopersicon esculentumMill)果实的总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到预期大小的该基因编码区内部分DNA序列,插入到质粒载体pGEM-3zf(+)的...
【关键词】 番茄；ACC合成酶；反义RNA-核酶嵌合基因；
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【中文期刊】 周斌 周总光 等 《中华实验外科杂志》 2018年35卷7期 1229页ISTICCA
【摘要】 Toll样受体4(TLR4)基因2287T突变体则是我们在中国人中鉴定发现的一种有义突变,为研究该突变体的功能,我们构建了其过表达慢病毒及稳定表达细胞株.一、材料与方法1.GV358-TLR4 2287T质粒构建及鉴定:GV358质粒采用A...
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【中文期刊】 王旻东 袁文勇 等 《中国法医学杂志》 2014年29卷5期 486-487页ISTICCSCD
【摘要】 1 案例资料1.1 简要案情作者在对1例非正常死亡案件死者的血样进行DNA检验中,发现D3S1358基因座呈三带型.1.2 检验方法STR分型 按照硅珠法[1]提取血样模板DNA,用Identifiler Plus荧光检测试剂盒进行PCR扩...
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【中文期刊】 陈智嘉 谷励 等 《中国生物制品学杂志》 2012年25卷9期 1139-1142页ISTICCSCDCABP
【摘要】 目的 原核表达并纯化翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP).方法 以人乳腺癌细胞系MCF-7总RNA为模板,PCR扩增TCTP基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+...
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【中文期刊】 余茜 徐蕾 等 《中国生物制品学杂志》 2012年25卷4期 426-428,436页ISTICCSCDCABP
【摘要】 目的 构建细胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达.方法 以pMD19-T simple-Ipr1质粒为模板,采用PCR法扩增Ipr...
【关键词】 结核病；细胞内病原体抗性基因1；原核细胞；
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【中文期刊】 汪玉洁 白云 等 《现代生物医学进展》 2012年12卷6期 1001-1005页ISTICCA
【摘要】 目的:构建含SNP位点的血管内皮生长因子(VEGF)基因YUTR的荧光素酶报告基因载体,为进一步揭示VEGF基因3'UTR的单核苷酸多态性(SNP)影响肺癌发病风险的分子机制奠定基础.方法:以rs3025039和rs3025040两个位点均...
- 概要：
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【中文期刊】 方萌 李旺 等 《中国生物制品学杂志》 2012年25卷6期 661-664页ISTICCSCDCABP
【摘要】 目的 在大肠杆菌中表达4Aβ1-15,并进行纯化.方法 以重组质粒pcDNA3.1-s4Aβ1-15为模板,PCR扩增1-2Aβ1-15基因,并克隆至pQE30a原核表达载体中,构建重组表达质粒pQE30a-2Aβ1-15,再以其为模板,扩...
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【中文期刊】 周帅 杨镒宇 等 《热带医学杂志》 2012年12卷9期 1053-1056页ISTICCA
【摘要】 目的 从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础.方法 根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PC...
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【中文期刊】 杨李 周鹰 等 《中国媒介生物学及控制杂志》 2012年23卷4期 289-291页ISTICCA
【摘要】 目的 建立粉尘螨变应原第1组分全长基因原核表达质粒pCold-TF-Derf1.方法 以质粒pET-28a(+)-Derf1为模板扩增目的基因Der f 1,克隆至pCold-TF DNA载体,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达并用S...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 尹志奎 郑斌 等 《新乡医学院学报》 2012年29卷5期 327-329页ISTICCA
【摘要】 目的 体外制备刚地弓形虫醛缩酶( aldolase)蛋白并纯化.方法 以刚地弓形虫cDNA链为模板,聚合酶链反应扩增aldolase基因,克隆至质粒pGEX-4T-1上,转化至大肠杆菌BL21；异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,亲和层析...
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- 结论：
【中文期刊】 赵艾君 郑毛根 《中国现代医学杂志》 2011年21卷17期 1981-1985页ISTICCA
【摘要】 目的 构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒,为进一步研究该基因功能奠定基础.方法 合成含靶向ABCE1基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的RNAi-ReadypSIREN-DNR-DsRed-...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 殷力 王义生 等 《中华实验外科杂志》 2008年25卷12期 1657-1659页ISTICCA
【摘要】 目的 构建骨形成蛋白(BMP)-2、转化牛长因子(TCF)-β1双基因真核表达载体.方法 以pGEM-T-BMP-2及pGEM-T-TGF-β1两个质粒为模板,分别用引入新的酶切位点引物,PCR扩增出长度为1188 bp的BMP-2和1 1...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 江千里 孟凡义 等 《白血病·淋巴瘤》 2007年16卷3期 161-164页ISTICCA
【摘要】 目的 建立一个荧光实时定量PCR(RQ-PCR)共用质粒标准品,用于同时检测bcr-abl P210白血病融合基因和abl内参基因.方法 分离K562细胞RNA,反转录为cDNA,以此为模板,设计引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回...
【关键词】 基因,bcr-abl；实时定量PCR；质粒；
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【中文期刊】 李倩 荫俊 等 《生物技术通讯》 1999年10卷3期 180-182页ISTICCA
【摘要】 从烧伤病房病人烧伤感染创面分离到9株金黄色葡萄球菌,经纤溶活性测定,选纤溶活性最高的作为PCR扩增模板.将扩增出的葡激酶基因片段插入pUC18载体质粒,转化大肠杆菌DH5α,筛选出PUC-SAK阳性克隆,经DNA序列测定证实该基因片段为一种...
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