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【中文期刊】 秦江楠 毕春霞 等 《微生物学杂志》 2014年34卷3期 30-35页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为深入研究smp基因的功能,需构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株.首先,PCR扩增D2株smp基因上游、下游片段作为上下游同源臂,同时扩增获得氯霉素抗性(cat)基因,采用SOE-PCR方法将各片段连接,然后双酶切后克隆入自杀质粒p...
【中文期刊】 乔凤 陈泽良 等 《中国生物工程杂志》 2007年27卷12期 1-5页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 突变株的构建是细菌基因功能研究的前提.构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒.在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因,在该基因两侧添加多个酶切位点,构建成为pUC19K.利用该质粒,构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因的突变...
【中文期刊】 胡静 俞守义 等 《中国公共卫生》 2003年19卷6期 641-643页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株.方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列,设计PCR引物,扩增并克隆了irp6结构基因,在体外进行精确突变后,插入氯霉素抗性基因...
【中文期刊】 郭通 刘雄 等 《生物技术通讯》 2015年26卷3期 321-324页 ISTICCA
【摘要】 目的:构建无标记的鲍曼不动杆菌pilO基因缺失突变株,通过表型鉴定pilO基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响.方法:PCR扩增pilO基因上下游各1 kb同源臂,连接至pMO130-TelR自杀质粒,质粒转化大肠杆菌S17-1后再接合至鲍...
【中文期刊】 凌峰 王晓春 等 《江苏大学学报(医学版)》 2013年23卷5期 369-372,376页 ISTICCA
【摘要】 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp05...
【关键词】 幽门螺杆菌; 细胞毒素相关基因致病岛; 自杀质粒;
【中文期刊】 葛菁萍 高先军 等 《中国农学通报》 2011年27卷23期 102-108页
【摘要】 优化副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD 1.7的电转化条件,为构建L.paracasei HD 1.7prcR基因敲除突变株奠定基础.通过电转化方法将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L.paraca...
【中文期刊】 闫广谋 王兴龙 等 《中国兽医学报》 2007年27卷5期 690-694,699页
【摘要】 通过构建自杀质粒,用定向同源重组的方法,把改造的萤火虫萤光素酶报告基因Luc NF+替换布鲁氏菌S19疫苗株Bp26基因部分片段,构建出布鲁氏菌Bp26基因缺失突变株△S19-1.在此基础上,用同样的方法,敲除△S19-1上的毒力基因Bmp...
【中文期刊】 郭铃 孙靓 等 《中国生物工程杂志》 2011年31卷8期 79-84页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将含有鼠李糖乳杆菌同源序列的自杀质粒pUC-ldhD-Ter 转化到鼠李糖乳杆菌JCM 1553中,成功获得2株含四环素抗性的重组鼠李糖乳杆菌GL-1和GL-2.采用PCR技术鉴定重组菌株染色体基因组上含有四环素抗性基因Ter;生长曲线说明...
【中文期刊】 李铁民 江崎孝行 《中国人兽共患病杂志》 1999年16卷5期 12-14页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的为探讨伤寒沙门氏菌肠毒素的致病机理.方法根据已知的鼠伤寒沙门氏菌的肠毒素基因序列,设计 PCR 引物,扩增并克隆了伤寒沙门氏菌的肠毒素结构基因.双酶切造成部分序列缺失,亚克隆于自杀质粒后,通过电穿孔转化,同源重组替换野生型肠毒素基因.结...
【中文期刊】 卢凤英 苗双 等 《中国家禽》 2013年35卷16期 21-24页
【摘要】 用PCR方法扩增tbdR2基因的左右臂和壮观霉素抗性基因表达盒,然后将以上3个片段组成的同源重组同源臂LSR连接到自杀性质粒pDS132上,构建得到重组自杀质粒pDS-TbdR2-LSR.再将此质粒通过接合转导的方法导入到鸭疫里默氏杆菌CH...
【中文期刊】 贺云霞 徐慧 等 《中国畜牧兽医文摘》 2011年27卷5期 80-80页
【摘要】 为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5’末端~13BamHI位点,下游引物5’末端加SalI位点,
【中文期刊】 邵帅 凌宏志 等 《黑龙江大学自然科学学报》 2023年40卷4期 434-441页
【摘要】 为了研究阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,E.cloacae)SDM的2,3-丁二醇脱氢酶(budC)基因对乙偶姻产生的影响,采用自杀质粒同源重组技术敲除该基因.根据E.cloacae SDM的budC基因序列设计引物,...
【中文期刊】 王向玲 纪春岩 等 《山东大学学报(医学版)》 2006年44卷4期 336-340页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建多药耐药基因(MDR1)启动子调控的CD-TK双自杀基因真核表达载体用于耐药白血病的靶向性基因治疗.方法:采用PCR方法从K562/A02细胞基因组DNA中扩增MDR1启动子,将其连接到双自杀基因CD-TK的上游,构建pcDNA3...
【中文期刊】 陈保德 尹一兵 等 《微生物学通报》 2004年31卷5期 55-59页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以绿色荧光蛋白(GFP)作为体内研究的分子探针,将肺炎链球菌毒力基因与gp融合构建肺炎链球菌自杀性荧光报告质粒,利用同源重组的原理,使gfp整合入肺炎链球菌基因组中,建立体内研究肺炎链球菌基因表达的荧光报告系统,并用荧光激发、生物学特征和生...
【中文期刊】 钟俐强 杨斯皓 等 《重庆医学》 2010年39卷9期 1036-1038页 MEDLINEISTICCA
【摘要】 目的 构建含胸苷激酶基因(TK自杀基因)的pGEX-4T-2-TK原核表达质粒,观察其在大肠杆菌中表达情况,为肿瘤基因治疗奠定基础.方法 聚合酶链式反应(PCR)扩增TK基因片段,利用限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ将其连接至原核表达载体p...
【中文期刊】 皈燕 吴敬波 《肿瘤预防与治疗》 2009年22卷2期 122-125页 ISTIC
【摘要】 目的:探讨利用分子生物学基因重组技术构建PMG-36e-CD::upp自杀基因重组质粒的方法.方法:用小量制备质粒DNA的方法分别提取表达型质粒载体PMG-36e和自杀基因pORF-CD::upp,以质粒pORF-CD::upp为模板PCR...
【关键词】 自杀基因; 胞嘧啶脱氨酶; 尿嘧啶磷酸核糖转移酶;
【中文期刊】 逄晓阳 刘国文 等 《动物医学进展》 2005年26卷7期 15-18页
【摘要】 DNA分子的人工合成是基因工程技术的基础,改变反刍动物瘤胃微生物DNA的结构,能够使得动物表达出不同的蛋白质,反刍动物的生长模式也因此而发生不可预知的改变.正在应用的或处于研究阶段的构建瘤胃基因工程菌的方式主要有基因缺失技术、基因复制性重组...
【中文期刊】 熊建英 韩泽平 等 《中华医院感染学杂志》 2016年26卷21期 4869-4872页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据.方法 通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD44...
【中文期刊】 彭亮 潘嘉韵 等 《中华医院感染学杂志》 2015年5期 961-964页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建奇异变形菌(PMI)聚磷酸盐激酶1(polyphosphate kinase 1,PPK1)基因缺失株,为研究 ppk1基因在PM I致尿路感染中的作用及其机制奠定基础。方法通过融合PCR将目的基因上游及下游同源臂连接成一个片段,...
【中文期刊】 杨鹏 王琦 等 《微生物学通报》 2014年41卷10期 1961-1968页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [目的]解决前期研究中所构建的以甘油为底物合成聚3-羟基丙酸(P3HP)的代谢途径中存在两个主要的问题——细胞内还原力不平衡和质粒丢失,以提高P3HP的产量.[方法]克隆来源于肺炎克雷伯氏菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)氧化还原酶基因,...
【中文期刊】 阎晓然 吴红 等 《中华眼科杂志》 2008年44卷4期 310-314页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 探讨PWZL质粒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(CD)双自杀基因系统在前体药物作用下对人晶状体上皮细胞(LEC)的杀伤效应.方法 为实验研究.以PWZL质粒为载体将双自杀基因转入体外培养的LEC,然后...
【中文期刊】 刘雷 黄星华 等 《国际泌尿系统杂志》 2018年38卷2期 177-180页 ISTIC
【摘要】 目的 研究在前体药物作用下PCA3启动子联合CD-TK基因的真核表达载体对体外前列腺癌细胞特异性杀伤效应.方法 将已构建好pHBAd-PCA3-CD-TK真核重组质粒和对照组质粒分别转染到前列腺癌细胞、对照组细胞,并以更昔洛韦(Gancic...
【学位论文】 作者: 陈保德 导师:尹一兵 重庆医科大学 临床医学 临床检验诊断学(硕士) 2003年
【摘要】 目的:构建肺炎链球菌自杀性荧光报告质粒,将肺炎链球菌溶血素基因与荧光报告基因融合,在体内环境中通过荧光的观察来分析溶血素的表达情况,为进一步研究肺炎链球菌毒力因子在活细胞内的定位和功能分析以及规模筛选毒力基因打下基础.方法:采用基因克隆技术...
【中文期刊】 顾丽萍 丁超 等 《中国人兽共患病学报》 2023年39卷8期 727-732页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 敲除伤寒沙门菌hns基因,分析其对伤寒沙门菌主要毒力基因转录的影响.方法 本研究利用 自杀质粒法与RED重组法敲除伤寒沙门菌hns基因;RED重组法先构建phoPQ基因缺失株(△phoPQ),再敲除hns基因(△phoPQ-hns);...
【中文期刊】 钱锋 潘卫庆 等 《生物化学与生物物理进展》 2001年28卷5期 732-735页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具,在体内外都获得了成功的应用.为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD908株中,tetR-loxP-neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CV...
【中文期刊】 张丽娟 高守一 等 《遗传学报》 2002年29卷10期 936-940页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 Tat(Twin-arginine translocation)双精氨酸转运系统是最新证实的原核生物细菌中运输折叠蛋白的主要途径.是与经典的sec分泌系统完全不同的蛋白运输系统.通过对已测序的O1群霍乱弧菌E1 Tol生物型菌株N16961...
【中文期刊】 张兰梨 张倩倩 等 《水生生物学报》 2018年42卷1期 1-10页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 为了探讨Cpx系统在嗜水气单胞菌生长及毒力等方面发挥的作用,利用融合PCR和基因同源重组原理,以自杀质粒pRE112为载体构建缺失57—1879 bp序列的cpxR-A基因簇突变株 Δcpx,然后比较缺失株和野生株在生长、生物膜形成、应激耐...
【中文期刊】 杨秋 周妍妍 等 《实用医学杂志》 2016年32卷3期 362-366页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:探讨霍乱疫苗株 NFYY101溶血素 hlyA 基因敲除及绿色荧光蛋白的构建。方法:将 hlyA基因上游片段(hlyAup)、hlyA 下游片段(hlyAdown),克隆入 pUC18中,再在两者间插入绿色荧光蛋白(lacz-GFPu...
【中文期刊】 张加勤 饶慧华 等 《中国人兽共患病学报》 2015年31卷7期 627-630页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.方法 分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3 '、5 '侧翼序列,将clpP基因及其3'、5 '侧翼序列克隆至pMD...
【中文期刊】 吴春雪 陈强 等 《华中科技大学学报(医学版)》 2014年4期 399-404页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:为深入研究鼠伤寒沙门菌毒力基因 spvB的功能,制备鼠伤寒沙门菌 spvB基因完全缺陷变异株,观察spvB基因缺陷株在体外酸性环境中的生存能力。方法根据鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvB基因缺陷性同源性核...
【中文期刊】 楼宏强 葛玉梅 等 《浙江大学学报(医学版)》 2013年42卷2期 141-148页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系.方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于...
【关键词】 弯曲杆菌,空肠/致病力; 小鼠,基因敲除; 鞭毛;
【中文期刊】 王华 刘俊 等 《中国免疫学杂志》 2012年28卷9期 775-778页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagL基因缺失株,为研究cagL基因的功能奠定基础.方法:利用同源重组原理,PCR扩增该基因编码区两侧序列,作为同源臂,构建出带卡那霉素抗性标志的载体,采用电穿孔法将其转化入受体菌中,并经PCR验证后获得了...
【中文期刊】 白先放 梁伟 等 《基因组学与应用生物学》 2012年31卷3期 249-256页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为研究甘蓝黑腐病菌Xcc8004基因组中一个功能未知的假定蛋白XC_1348的基因功能,本研究用自杀质粒pK18mob和pK18mobSacB分别通过同源单交换和同源双交换构建XC_1348的非极性整合突变体1348nk和有标记的缺失突变体...
【中文期刊】 莫伟兰 张子宇 等 《基因组学与应用生物学》 2011年30卷5期 564-570页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 水稻白叶枯病菌是一种引起水稻白叶枯病的植物病原细菌,水稻白叶枯病是世界水稻生产中最严重的细菌性病害之一.本研究采用携带同源序列的自杀质粒pK18MobGⅡ整合的办法构建了水稻白叶枯病菌中国菌株13751编码6-磷酸葡糖酸内酯酶的基因XOO2...
【中文期刊】 禚优优 来元亮 等 《基因组学与应用生物学》 2011年30卷5期 521-528页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)是水稻的主要病原细菌之一,该菌引起的水稻细菌性条斑病可导致水稻减产、品质下降.Xoc GX01菌株基因组中含有一个与十字花科黑腐病菌(Xanthom...
【中文期刊】 郑恩金 高大庆 等 《中国人兽共患病学报》 2010年26卷11期 999-1003页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 探讨迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda, E.tarda)溶血相关基因(E.tarda haemolysin activator gene,eha)基因调控该菌毒力基因的作用.方法 利用自杀质粒pHM5,缺失E.tar...
【中文期刊】 姚秋阳 杨玉芹 等 《基因组学与应用生物学》 2010年29卷6期 1047-1054页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 6-磷酸果糖激酶是糖酵解途径中的关键酶,它催化糖酵解途径中第一个不可逆反应.本研究利用pK18mobsacB自杀质粒采用同源双交换的方法对野油菜黄单胞菌Xcc8004中的6-磷酸果糖激酶基因(XC_0872)进行缺失突变,获得无标记的缺失突...
【中文期刊】 刘筱娣 段劲 等 《中国组织工程研究与临床康复》 2010年14卷7期 1231-1234页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:变形链球菌是公认的主要致龋菌,细菌的黏附、生物膜形成、产酸、耐酸等各个表型都与细菌的致龋性相关.有研究结果提示,苏氨酰-tRNA合成酶基因(threonyl-tRNA synthetase,thrS)可能与变形链球菌的黏附、产酸、耐酸...
【中文期刊】 母润红 邵世和 等 《中国免疫学杂志》 2009年25卷10期 932-935,939页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建幽门螺杆菌(H.pylori)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株.为Cag致病岛致病机制及H.priori功能研究奠定基础.方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连接到PCR扩增hp0527两端区域产生的2...
【中文期刊】 谢琳卡 陈安群 等 《华中科技大学学报(医学版)》 2009年38卷5期 571-574页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建铜绿假单胞菌新的mucA基因突变菌株,为研究新突变的mucA基因功能提供实验菌株.方法 首先将含新突变的mucA基因同源片段与自杀质粒pEX100T相连接,构建质粒pEXmucA56,再将质粒pEXmucA56转化人大肠埃希菌DH...
【中文期刊】 段劲 陈伟 等 《中国组织工程研究与临床康复》 2008年12卷20期 3918-3921页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:为了深入研究磷酸蔗糖变位酶基因psm与变形链球菌S.mutans致龋性之间的关系,需要利用同源重组原理构建psm基因功能丧失菌株,因此构建一个符合同源重组条件的合格质粒载体就成为实验工作的重要前提.目的:构建变形链球菌S.Mutans...
【中文期刊】 段劲 刘筱娣 等 《实用口腔医学杂志》 2008年24卷1期 69-73页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建变形链球菌UA159磷酸蔗糖变位酶基因(phospho-sugar mutase gene,psm)功能丧失菌株,为进一步研究变形链球菌psm功能做准备.方法:将变形链球菌UA159 psm内部上、下游2段序列分别克隆至自杀质粒p...