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【中文期刊】 王鸿丽 刘锋 等 《军事医学》 2011年35卷7期 541-545页 ISTICCSCDCA
【摘要】 目的 提高银染色后二维凝胶电泳图谱中蛋白质斑点的鉴定率.方法 采用欧洲分子生物学实验室(EMBL)银染色方法结合改进后的质谱兼容胶内酶切方法并应用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(NanoUPLC-nano-ESI-MS/MS)对二维凝胶...
【中文期刊】 肖晓萍 郭正光 等 《质谱学报》 2017年38卷2期 187-194页
【摘要】 分别应用20、100和200 W超声功率对牛血清白蛋白以及人尿蛋白组的胶内条带进行胶内酶切,通过比较不同功率鉴定的多肽数和蛋白数,确定最优的超声功率.同时比较超声辅助酶切与传统过夜酶切方法,并分析超声辅助胶内酶切方法的特点.结果表明,超声功...
【中文期刊】 王鸿丽 刘炳玉 等 《军事医学科学院院刊》 2005年29卷2期 168-172页 ISTICCSCDCA
【摘要】 目的:改善胶内酶切的肽段回收率,提高蛋白质的有效鉴定率.方法:将改进的胶内酶切"四步提取法",应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析.结果:该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率,改善了质谱图谱的质量.蛋白质的有效鉴定率达89.6%,其中,数据...
【中文期刊】 韩伟东 王栋 等 《中国畜牧兽医》 2009年36卷7期 106-111页
【摘要】 针对银染蛋白的胶内酶切质谱鉴定成功率较低的技术现状,对影响牛精子蛋白酶切鉴定的酶量、酶切时间、凝胶存储时间等影响因素进行了摸索,并优化了挖点、脱色、脱水、酶切消化和抽提肽段等操作细节,同时对质谱峰图中出现的污染问题进行了分析解决,提高了蛋白...
【中文期刊】 谷苗 许彬 等 《分析化学》 2007年35卷9期 1343-1346页
【摘要】 本研究成功地将一种有机小分子表面活性剂RapiGest SF (Waters )用于改进电泳分离的蛋白质的鉴定效率. 通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的肽质量指纹谱,考察了酶切时间、加入量、加样次序、点靶方法...
【外文期刊】 Nielsen M ; Lambertsen KL ; 等 《Experimental Brain Research》 2009年194卷1期 17-27页 SCISCIEMEDLINE
【外文期刊】 Oberdorfer K ; Pohl S ; 等 《European journal of clinical microbiology and infectious diseases: Official publication of the European Society of Clinical Microbiology》 2006年25卷10期 657-663页 SCISCIEMEDLINE
【关键词】 Bacterial Proteins; Electrophoresis; Gel;
【中文期刊】 盛仙永 胡正海 《实验生物学报》 2005年38卷4期 309-316页 SCIMEDLINEISTICCSCDBP
【摘要】 泛素/蛋白酶体系统(UPP)是真核细胞内蛋白质选择性降解的主要途径,而蛋白酶体是UPP中蛋白质降解的场所.本文应用细胞学、统计学方法以及FTIR技术研究了蛋白酶体抑制剂MG132对青扦(Pecea wilsonii)花粉萌发、花粉管生长的影...
【中文期刊】 殷爱红 胡家 等 《首都医科大学学报》 2012年33卷4期 549-551页 ISTICPKUCA
【摘要】 <篇首> 近些年,蛋白质组学研究技术手段不断进步,研究策略不断更新,归纳起来主要分为2种策略:"top-down"策略和"bottom-up"策略."top-down"策略是先对蛋白质混合物进行分离,然后进行蛋白质酶解和质谱鉴定[1-2].将蛋...
【中文期刊】 张春燕 杨烨 等 《中国病理生理杂志》 2010年26卷12期 2470-2472页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:比较慢性间歇性缺氧大鼠与正常大鼠肾脏组织蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织中的差异蛋白表达谱.方法:以固相pH 梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和慢性间歇性缺氧大鼠的肾脏组织...
【中文期刊】 刘云鹏 倪慧娟 等 《微生物学通报》 2008年35卷4期 629-632页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 采用3种方法对不同酵母菌的总 DNA 进行提取,经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000 型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析,表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总 DNA 质量最好,基本无 DNA 碎带,蛋白质污染小.通过对...
【中文期刊】 李林 汪世平 等 《中国血吸虫病防治杂志》 2008年20卷3期 168-173页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分.方法 收集感染后32d的日本血吸虫成虫,制备成虫蛋白,经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离,选取31～32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定,通过凝胶图像分析...
【中文期刊】 胡日红 应旭旻 等 《实用医学杂志》 2008年24卷8期 1318-1320页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在动静脉内痿血管内皮中的表达及其对动静脉内瘘功能的影响.方法:纳入20例血液透析患者的失功内瘘及16例新建内瘘,用手术剪切的方法采集血管标本.通过免疫组织化学...
【中文期刊】 尹忠 张雪光 等 《中国老年学杂志》 2007年27卷13期 1225-1228页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 探讨人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIM P-1)对肾脏器官衰老过程血管生成的影响.方法 对3、12、24月龄人 TIMP-1转基因小鼠和野生型小鼠肾组...
【关键词】 基质金属蛋白酶组织抑制物-1； 肾脏； 血管生成；
【中文期刊】 朱永烽 刘志刚 等 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2006年24卷4期 241-246页 MEDLINEISTICPKUCSCD
【摘要】 目的 构建粉尘螨6类变应原(Dermatophagoides farinae,Der f6)基因的高效原核表达载体,并进行表达、纯化及生物学功能分析.方法 根据Der f6基因已知序列,设计1对引物,通过对纯培养的粉尘螨提取总RNA,采用R...
【中文期刊】 谭光宏 魏于全 等 《海南医学院学报》 2006年12卷1期 1-6页 ISTICPKU
【摘要】 目的:体外扩增猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,构建猪和小鼠endoglin重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定.方法:设计猪和小鼠endoglin胞外段基因序列的引物,利用RT-PCR技术扩增克隆...
【中文期刊】 孙立 田晓滨 等 《中国临床康复》 2006年10卷9期 84-86页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒.方法:实验于2005-03/2005-10在华中科技大学同济医学院公共实验平台完成.①通过聚合酶链反应对pcDNA3.1-BMP2及pUC-CAGGS-VEGF165的...
【关键词】 骨形态发生蛋白质类； 受体,血管内皮生长因子； 基因表达；
【中文期刊】 路晓钦 《中成药》 2005年27卷6期 附14-附16页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:探讨糖心康胶囊对糖尿病(DM)合并冠心病(CHD)的患者的临床疗效.方法:观察糖心康胶囊对71例糖尿病合并冠心病患者临床疗效,并与用心痛定治疗的65例患者对照.结果:糖心康胶囊能明显改善患者的临床症状和心功能(P＜0.01),在调整患...
【中文期刊】 杨芳 何援利 等 《中国临床康复》 2005年9卷19期 104-106页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建血管生成抑制因子人内皮抑素非融合蛋白大肠杆菌表达载体.方法:实验于2004-02/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成,表达质粒由中山大学医药分子实验室保存,肝细胞来源于南方医科大学珠江医院引产胎儿肝脏.用反转录多聚合...
【关键词】 内皮/解剖学和组织学； 逆转录聚合酶链反应； 基因表达；
【中文期刊】 张山鹰 许龙善 等 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2004年22卷2期 86-89页 MEDLINEISTICPKUCSCD
【摘要】 目的建立一种间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(PvMSP-1)基因型检测技术.方法设计针对PvMSP-1ICB5～ICB6多态区的引物进行PCR,其产物用PvuⅡ内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳检测,鉴别我国间日疟原虫现场分离株基因型.结果98份间日疟...
【中文期刊】 李克 王琳 等 《中华传染病杂志》 2004年22卷1期 13-15页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的为探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的功能,在真核生物酵母细胞中表达HCV NS3基因.方法用聚合酶链反应(PCR)的方法以HCV全长质粒pBRTM/HCV-1为模板扩增HCV NS3基因,克隆到pGEM-T载体中,双酶切后回收...
【中文期刊】 赵海丹 梅长林 等 《第二军医大学学报》 2003年24卷1期 25-28页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:体外表达并纯化多囊蛋白1胞外区片段.方法:提取健康人肾组织总RNA,用一步法RT-PCR选择扩增编码多囊蛋白1胞外多拷贝区的2个cDNA片段,并将之克隆到融合蛋白表达载体pQE30中,转染含有阻遏质粒pREP4的大肠杆菌M15.异丙基...
【关键词】 多囊蛋白1； 多囊肾病,常染色体显性； 融合蛋白；
【中文期刊】 孟洪弟 潘虹 等 《中华儿科杂志》 2002年40卷5期 280-282页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的探讨MeCP2基因常见突变是否对Rett综合征临床诊断有帮助.方法对23例Rett综合征患儿,部分患儿家长和4名正常女性分别提取外周血基因组DNA.采用PCR方法扩增MeCP2基因第3外显子 nt22643～nt23022片段,限制性内...
【中文期刊】 马壮 张胜 等 《临床口腔医学杂志》 2018年34卷9期 530-532页 ISTIC
【摘要】 目的:研究颞下颌关节盘穿孔时关节盘细胞合成及分泌Ⅰ型胶原能力的改变及其在颞下颌关节盘穿孔发生中的作用.方法:收集颞下颌关节髁突肥大(对照组)及颞下颌关节盘穿孔(实验组)患者因手术切除的手术标本,采用酶消化法原代培养,培养的细胞经甲苯胺蓝染色...
【中文期刊】 邱会平 程晓东 等 《江苏大学学报（医学版）》 2013年23卷4期 308-312页 ISTICCA
【摘要】 目的:在大肠埃希菌中表达人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)反式激活蛋白(trans activative transcription protein,Tat),为进一步研...
【中文期刊】 王鸿丽 刘锋 等 《军医进修学院学报》 2011年32卷12期 1260-1262,1285页 ISTICCA
【摘要】 目的 改进二维凝胶电泳银染色后的胶内酶切方法,提高蛋白质的鉴定率.方法 应用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(HD-MS),对改进方法(酶切中加入非离子去污剂正十二烷-β-D-麦芽糖苷)和原有方法进行比较.结果 2D胶上的10个蛋白质斑点...
【关键词】 银染； 胶内酶切； 正十二烷-β-D-麦芽糖苷；
【中文期刊】 孟晓梅 李长贵 《中国医师杂志》 2009年11卷5期 587-590页 ISTICCA
【摘要】 目的 探讨人尿酸盐阴离子交换器(hURAT1)基因启动子-45位C→G突变与原发性高尿酸血症的相关性.方法 对217例原发性高尿酸血症患者(UA组)及491例健康对照者(CON组)应用PCR技术扩增目的 片段,PCR产物以限制性内切酶Mva...
【关键词】 阴离子转运蛋白质类/遗传学； 尿酸； 突变；
【中文期刊】 姜海蓉 彭方毅 等 《天津医药》 2009年37卷12期 993-995页 MEDLINEISTICCA
【摘要】 目的:构建pET32a(+)HPV18E6原核表达质粒并优化其表达条件,探讨喉癌组织中HPV18E6蛋白的表达及意义.方法:应用基因重组技术,构建pET32a(+)与HPV18E6的原核表达重组质粒,采用PCR方法扩增HPV18E6基因,经...
【中文期刊】 祝畅 张传汉 等 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 2008年15卷4期 255-258页 ISTICCA
【摘要】 目的 构建神经元特异性烯醇化酶(NSE)特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体.方法 采用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和NSE特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBlue-script-SK中.利用酶切反应鉴定...
【中文期刊】 徐岩 梅长林 等 《中国中西医结合肾病杂志》 2008年9卷1期 7-9页 ISTIC
【摘要】 目的:体外表达并纯化Cyr61蛋白片段.方法:提取乳腺癌组织总RNA,用一步法RT-PCR选择扩增编码Cyr61蛋白的cDNA片段,并将之克隆到融合蛋白表达载体pQESOL中,转染大肠杆菌Rosetta-gamiTM2.异丙基硫代半乳糖苷(...
【中文期刊】 蔡莉蓉 刘秀华 等 《微循环学杂志》 2008年18卷1期 1-5页 ISTIC
【摘要】 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对培养的心肌微血管内皮细胞(MMEC)蛋白质表达变化的影响.方法:将培养的MMEC随机分为二组(n均=3):(1)bFGF诱导组(bFGF组):向培养瓶内加入终浓度10 ng/ml的bFGF,置细...
【关键词】 心肌微血管内皮细胞； 碱性成纤维细胞生长因子； 双向凝胶电泳；
【中文期刊】 祝畅 刘志恒 等 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 2007年14卷1期 14-17页 ISTICCA
【摘要】 目的 构建GFAP特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体.方法 用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和GFAP特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBluescript-SK中, 酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK...
【中文期刊】 秦鑫 刘又宁 《山西医药杂志》 2006年35卷6期 511-513页 ISTICCA
【摘要】 <篇首> 细胞凋亡(apoptosis)是各种生理的或非生理性的因素激活细胞自身固有的程序所导致的非坏死性改变,这种死亡的特征是核染色质密度增高并凝聚在核膜周边,形成"核着边"(margination)现象,凋亡小体的形成.其生物化学反应主要是...
【中文期刊】 王家保 杜中军 等 《生物技术通讯》 2006年17卷5期 757-759页 ISTICCA
【摘要】 目的:从番石榴叶片中快速提取高质量的总DNA.方法:改良CTAB法.主要改进之处在于不用液氮,而是直接研磨硅胶干燥样品;用高浓度CTAB、低浓度乙醇与NaCl盐析相结合等方法去除多糖.结果:应用改良后的方法可以快速提取番石榴叶片总DNA,有...
【中文期刊】 张波 王任直 等 《中国应用生理学杂志》 2006年22卷1期 26-29页 MEDLINEISTICCSCDCA
【摘要】 目的:用蛋白质组学方法初步分析大鼠海马蛋白质的表达.方法:提取大鼠海马蛋白质样品后,用双向凝胶电泳对其分离,经考马斯亮蓝染色后,产生大鼠海马蛋白质双向凝胶电泳图谱.从凝胶上切割分离的蛋白质,经胰蛋白酶胶内酶解,通过基质辅助激光解吸/电离飞行...
【中文期刊】 杨芳 何援利 等 《世界华人消化杂志》 2005年13卷13期 1554-1557页 ISTICCA
【摘要】 目的:获得有活性的人内皮抑素(endostatin)融合蛋白.方法:从人胎肝组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出endostatin基因,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG...
【中文期刊】 刘妍 崔玉芳 等 《军医进修学院学报》 2005年26卷4期 263-265页 ISTICCA
【摘要】 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4B基因的酵母细胞表达载体,为探索HCV NS4B在细胞内的相互作用蛋白奠定基础.方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法在HCV全长质粒pBRTM/HCV-1为模板扩增HCV NS4B基因,克隆到...
【中文期刊】 王卫国 娄思权 等 《中国现代医学杂志》 2003年13卷7期 19-23页 ISTICCA
【摘要】 目的:构建人转化生长因子β2的真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2,检测其转染骨髓基质细胞后的表达.方法:用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF-β2全长cDNA,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点...
【中文期刊】 廖翔 应天翼 等 《生物技术通讯》 2003年14卷6期 509-511页 ISTICCA
【摘要】 介绍一种简便高效的从考马斯亮蓝染色的双向电泳凝胶切取蛋白质点,通过胶内酶切制备基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)样品的方法.该方法操作简便,样品的质谱鉴定结果经网上数据库检索检出率可高达80%以上,适于我国目前小规...
【中文期刊】 刘执玉 高杰 等 《中国现代普通外科进展》 2002年5卷4期 220-224页 ISTICCA
【摘要】 目的:VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用.方法:根据人VEGF-C的cDNA序列,设计合成一对5'端分别含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物,运用RT-RCR方法扩增人乳腺癌细胞MD...
【中文期刊】 李克 王琳 等 《军医进修学院学报》 2002年23卷1期 1-3页 ISTICCA
【摘要】 目的:为探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白的功能,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法在HCV全长质粒pBRTM/HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因,克隆到pGEM-T 载体中,双酶切...
【中文期刊】 张春燕 杨烨 等 《泸州医学院学报》 2011年34卷3期 255-257页
【摘要】 目的:比较慢性间歇性缺氧大鼠与正常大鼠肾脏组织蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织中的差异表达蛋白.方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和慢性间歇性缺氧大鼠的肾脏组织蛋白...
【中文期刊】 任耀辉 胡雅琴 等 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 2005年33卷2期 84-86页
【摘要】 对太白红杉总DNA提取方法进行了探讨,并对其不同部位和器官、不同处理方式材料进行了提取实验研究.通过琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶处理等方法对所提取的DNA样品进行检测.结果表明,改良后的CTAB法,对于太白红杉总DNA的提取是一种良好的简单...
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